損傷DNAの認識と選択的修復におけるRNAポリメラーゼIIサブユニットの機能の研究

2003 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 14771034
• Research Institution: Hokkaido University
• Principal Investigator: 山野 茂 北海道大学, 大学院・歯学研究科, 助手 (20312374)
• Keywords: RNAポリメラーゼII / 損傷DNA / DNA修復

Research Abstract

平成15年度
RNAポリメラーゼIIサブユニットのDNA修復における役割の解析
本研究の目的は真核生物における傷害DNAの修復メカニズムにRNAポリメラーゼIIのサブユニットが機能しているかどうかを検討することであった。このため、げっ歯類不死化細胞を培養し、遺伝子導入によりヒトRNAポリメラーゼIIサブユニットを強制発現させた。その後、紫外線やガンマ線などの物理刺激を用いて細胞傷害実験を施行し、DNA修復効率に関してマイクロサテライト解析、RNAポリメラーゼ阻害剤を用いた解析等により分子生物学的検討を行なった。マイクロサテライト解析では電気泳動ゲル上でのPCR反応産物の分布の変化から傷害細胞にDNA障害が生じていることが確認され、かつヒトRNAポリメラーゼIIサブユニット強制発現細胞でマイクロサテライト不安定性にわずかであるが変化がみられた。またRNAポリメラーゼII阻害剤のαアマニチンを用いた解析ではマイクロサテライト不安定性にみられた変化が減少した。以上からRNAポリメラーゼIIサブユニットの傷害DNA修復における役割の存在が示唆された。しかしながら、今回の研究では得られた結果がDNA修復の促進によるものかDNA修復を遅延あるいは抑制させる因子を阻害したことによるものかを厳密に検討するための解析は行なわれなかった。また、ヒトRNAポリメラーゼIIサブユニットを強制発現させない細胞において、物理刺激によりendogeneousなサブユニットの発現が誘導されるかどうかの検討も行なわれなかった。したがって本研究をさらに発展させてこれらの問題を検討し考察することが重要と思われた。