口腔癌治療におけるアポトーシス抑制遺伝子の制御―抗癌剤感受性増強効果―

2002 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 14771140
• Research Institution: The University of Tokushima
• Principal Investigator: 茂木 勝美 徳島大学, 歯学部, 助手 (20335805)
• Keywords: 口腔扁平上皮癌 / 抗癌剤 / アポトーシス / NF-κB

Research Abstract

本研究においてはヒト口腔扁平上皮癌細胞株B88細胞を用いて抗癌剤によるアポトーシスの誘導と転写因子NF-κBの関連について解析した。
B88細胞を抗癌剤である5-フルオロウラシル(5-FU)或いはシスプラチン(CDDP)にて処理すると、B88細胞の細胞増殖能は濃度依存性に抑制され、これがアポトーシスの誘導によることを確認した。
B88細胞を5-FU或いはCDDPにて経時的に処理し、NF-κB活性を検索したところ、5-FU処理においてNF-κB活性の抑制が認められた。同様の結果はヒト唾液腺癌細胞株cl-1細胞においても確認された。すなわち5-FU処理によりcl-1細胞のNF-κB活性の抑制が認められ、抗アポトーシス蛋白のうちTRAF-2とcIAP-1の発現低下が認められた。この際、アポトーシス関連因子であるCaspase8とCaspase3の活性化が認められた。
一方、B88細胞をCDDPで処理すると抗アポトーシス蛋白の発現に変化は認められなかったが、アポトーシス関連因子cytochrome c発現増加に伴うCaspase9活性の上昇とその下流に存在するCaspase3の活性化が認められ、ミトコンドリアを介したアポトーシス誘導の可能性が示唆された。
細胞に変異型IκB-αcDNAを遺伝子導入することで、強制的にNF-κB活性を抑制した細胞クローンを作成し、これら細胞をTNF-αにて処理してもアポトーシスは誘導されなかった。この原因を解析したところ、TNF-αによるTRAF-1の発現誘導に起因している可能性が示唆された。そこで、TRAF-1の発現をアンチセンスオリゴヌクレオチド処理或いはアンチセンスプラスミドの導入により抑制した場合、アポトーシスの誘導が確認された。
以上の検索結果より、NF-κBおよび抗アポトーシス蛋白の抑制により腫瘍細胞のアポトーシス誘導の増強が確認された。

Research Products

• [Publications] Azuma Masayuki: "Cisplatin induces apoptosis in oral squamous carcinoma cells by the mitochondria-mediated but not the NF-kappaB-suppressed pathway"Eur J Cancer, Oral Oncology. 39(3). 282-289 (2003)
• [Publications] Aota Keiko: "Stable inhibition of NF-kappa B in salivary gland cells does not enhance sensitivity to TNF-alpha-induced apoptosis due to upregulation of TRAF-1 expression"Experimental Cell Research. 276(1). 111-119 (2002)
• [Publications] Katsumi Motegi: "Effect of a mutant form of lkB-a on 5-fluorouracil-induced apoptosis in transformed human salivary gland cells"Eur J Cancer, Oral Oncology. 37(2). 185-192 (2001)
• [Publications] Aota Keiko: "5-Fluorouracil induces apoptosis through the suppression of NF-kappaB activity in human salivary gland cancer cells"Biochemical Biophysical Research Communication. 273(3). 1168-1174 (2003)