2014 Fiscal Year Annual Research Report
新規内皮細胞特異的遺伝子Ｓｅｍａ３Ｇを用いた動脈硬化抑制効果の検討
| Project/Area Number |
14J04473
|
|---|
| Research Institution | Chiba University |
|---|
Principal Investigator |
北本 匠 千葉大学, 医学研究院, 特別研究員(DC1)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2014-04-25 – 2017-03-31
|
| Keywords | semaphorin3G / 動脈硬化 |
|---|
| Outline of Annual Research Achievements |
セマフォリンは神経成長円錐に対する反発分子として同定されたガイダンス分子であるが、近年、血管新生、癌の発達そして自己免疫疾患に関与する等多彩な働きを有することが明らかになってきている。しかしながらセマフォリンの粥状動脈硬化進展における役割はほとんど明らかになっていない。そこで、分泌型のセマフォリンであり、かつ血管内皮細胞に特異的に発現しているセマフォリン3G (Sema3G)に着目し、粥状動脈硬化形成における役割を解析することとした。今年度は、粥状動脈硬化のモデル動物を作成し、血管壁におけるSema3Gの発現を検討するとともに、Sema3Gの欠損が粥状動脈病形成に与える影響を検討した。
発現解析として、粥状動脈硬化惹起因子である糖尿病、肥満がSema3Gの発現に与える影響を検討した。8週齡から高脂肪餌で飼育したマウス、および肥満2型糖尿病モデルであるob/obマウスの大動脈におけるSema3Gの発現をリアルタイムPCRで検討した。
高脂肪餌負荷後20週で解析を行った結果、腹部大動脈においてSema3Gの発現低下傾向を認め、その他の部位も全体的に発現が低い傾向にあった。
ob/obマウスでは、肥満に加えて高血糖が確認され、12週齡時に、大動脈弓部で有意なSema3Gの発現低下を認めた。
これらの結果から、動脈硬化惹起因子である肥満・インスリン抵抗性・高血糖といった因子に暴露された大動脈ではSema3Gの発現が低下する事が示唆された。更に、アポEノックアウトマウスと、Sema3Gノックアウトマウスを交配し、Sema3G/ApoEダブルノックアウトマウス (DKO)を作成し、同様の実験を行った所、DKOマウスで熟手の占める割合が約50%増大していた。今後は、Sema3Gのリコンビナント蛋白 (rSema3G)を作成し、単球/マクロファージの機能に与える影響を検討する予定である。
|
| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
初年度は動脈硬化モデルマウスである高脂肪食負荷ApoEノックアウトマウス（ApoE KO）の動脈硬化巣におけるSema3GやSema3G受容体の発現を観察する事を目的としていた。その実験に必要なマウスの交配は当初経験不足もあり、苦労もしたが、綿密に計画を立て、マウスを管理し、比較的予定通りに目的のマウスを作成する事が出来た。それに引き続き、高コレステロール餌を負荷し、動脈硬化巣におけるSema3Gの発現について、再現性のある表現型が確認された。更に今年度だけで表現型のメカニズム解析に移行し、その過程でマクロファージに注目し始めている。現在はマウスの実験と共に単球・マクロファージ系細胞であるTHP1細胞やRAW264.7細胞を用いたin vitro実験を並行して行うよう実験計画を立て、遂行中である。予定通りの実験を終え、次の実験計画を立案できている点で順調な進展という評価とした。
|
| Strategy for Future Research Activity |
動脈硬化の発症・進展には、単球/マクロファージが中心的役割を果たしている。また、既報では、同じく内皮細胞に発現がみられているSema3Aや3Eは、単球/マクロファージの機能との関連が報告されている。
そこで、Sema3Gのリコンビナント蛋白 (rSema3G)の作成し、単球/マクロファージの機能に与える影響を検討することとした。具体的には、マウス腹腔内マクロファージや単球/マクロファージ系細胞であるTHP1細胞やRAW264.7細胞におけるSema3G受容体の発現をRT-PCRで評価し、発現が確認された後、それらの細胞を用いて、rSema3Gが遊走能・接着能・増殖能・LDL取り込み能といった機能に与える影響を検討する予定である。
|
Research Products
(6 results)
