自己抗体が認識する新規tRNA結合蛋白(Wa抗原/NEFA/Nucb-2)の解析

2003 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 15030221
• Research Institution: Kyoto University
• Principal Investigator: 三森 経世 京都大学, 医学研究科, 教授 (10157589)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 田中 真生 京都大学, 医学研究科, 助手 (10332719) ; 藤井 隆夫 京都大学, 医学研究科, 助手 (70255462)
• Keywords: Wa抗原 / NEFA / Nucleobindin-2 / トランスファーRNA / 自己抗体 / 自己免疫疾患 / 強皮症 / RT-PCR

Research Abstract

抗Wa抗体は強皮症に特異的に検出されるまれな自己抗体として報告し,その対応抗原は4-5種類のtRNAと結合する48kDa蛋白であることを明らかにしていた.Wa抗原の実体は長く不明であったが,Wa抗原の遺伝子クローニングにより,NEFAまたはNucleobindin-2 (Nucb-2)として報告された分子と一致することが判明した.NEFA/Nucb-2はその構造上DNA結合蛋白と考えられるが,これまでのところDNAあるいはtRNAを結合したという報告はない.しかし,Wa抗原が一定の種類のtRNAと関連しNEFA/Nucb-2と一致したことは,同分子が新たなtRNA結合蛋白であり,tRNAが関与する蛋白翻訳系あるいはtRNAの代謝などで未知の機能を持つRNPマシーンである可能性が高い.本研究では我々が見出した抗Wa抗体の対応抗原(Wa/NEFA/Nucb-2)の機能を追求することを目的とした.
1.Wa抗原に結合するtRNAの同定:すべてのアミノ酸をカバーする既知の22種類のヒトtRNA塩基配列よりプライマーを合成し,RT-PCRによりtRNAの種類を同定するシステムを開発した.抗Wa抗体プロトタイプ血清が免疫沈降したtRNAを鋳型としてRT-PCRを行ったところ,His,Lys,Met,Pro,Valの5種類のアミノ酸に対応するtRNAが同定された.
2.Wa抗原全長cDNAの分離:Wa抗原をコードする全長cDNAを既知のNEFA/Nucb-2の塩基配列からRT-PCR法により合成した.既知の全長cDNAとともに,Exon 11のスキップによると考えられる90bp(30アミノ酸)が欠失した短鎖cDNAが分離された.両者から大腸菌に発現させた蛋白はともに抗Wa抗体陽性血清と反応することが確認された.今後このcDNAと発現蛋白を用いてtRNAとの結合能を検討する予定である.

Research Products

• [Publications] Tanaka M, Ozaki S, Kawabata D, Kishimura M, Osakada F, Okubo M, Murakami M, Nakao K, Mimori T: "Potential preventive effects of follistatin-related protein/TSC-36 on joint destruction and antagonistic modulation of its autoantibodies in rheumatoid arthritis."International Immunology. 15(1). 71-77 (2003)
• [Publications] Yoneda O, Imai T, Nishimura M, Miyaji M, Mimori T, Ozaki T, Domae N, Fujimoto H, Minami Y, Kono T, Bloom ET, Umehara H: "Membrane-bound form of fractalkine induces IFN-γ production by NK cells."Eur J Immunol. 33. 53-58 (2003)
• [Publications] Fujii T, Mimori T, Kimura N, Satoh S, Hirakata M: "Pseudoscleroderma associated with transforming growth factor β1-producing advanced gastric carcinoma : comment on the article by Varga."Arthritis Rheum. 48(6). 1766-1768 (2003)
• [Publications] Ida H, Huang M, Hida A, Origuchi T, Kawakami A, Migita K, Tsujihata M, Mimori T, Eguchi K: "Characterization of anticytoplasmic antibodies in patients with systemic autoimmune diseases."Mod Rheumatol. 13. 333-338 (2003)
• [Publications] Suzuki K, Sawada T, Murakami A, Matsui T, Tohma S, Nakazono K, Takemura M, Takasaki Y, Mimori T, Yamamoto K: "High diagnostic performance of ELISA detection of antibodies to citrullinated antigens in rheumatoid arthritis."Scand J Rheumatol. 32. 197-204 (2003)
• [Publications] Kawabata D, Tanaka M, Fujii T, Umehara H, Fujita Y, Yoshifuji H, Mimori T, Ozaki S: "Ameliorative effects of follistatin-related protein/TSC-36/FSTL1 on joint inflammation in a mouse model of arthritis."Arthritis Rheum. 50(2). 660-668 (2004)