ゲノミクス・プロテオミクスによる年齢推定に関する法医学的研究

2003 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 15209023
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research (A)
• Research Institution: 福井医科大学
• Principal Investigator: 安田 年博 福井大学, 医学部, 教授 (80175645)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 植木 美鈴 福井大学, 医学部, 教務職員 (00165656) ; 飯田 礼子 福井大学, 医学部, 助手 (40139788) ; 岸 紘一郎 群馬大学, 医学部, 教授 (30169841) ; 河合 康幸 福井大学, 医学部, 助手 (40324157)
• Keywords: 年齢推定 / 法医学的応用 / deoxyribonuclease / 血清 / 心筋梗塞 / 一次構造 / ペルオキシゾーム / 活性酸素

Research Abstract

本研究では、ゲノミクスおよびプロテオミクスの方法論を利用して、臓器や体液中に存在する各種の年齢依存性生体分子を検索し、これらをマーカーとして法医学的試料からの年齢推定法を確立することを目的とする。
1.マウス腎臓に見出された新規な年齢依存性生体分子M-LPの細胞生物学的性状を解明した。M-LPはペルオキシゾームに局在し、その分子中にペルオキシゾーム膜輸送シグナルを含有することが明らかとなった。さらに、M-LPはsuperoxide dismutase2遺伝子の発現を亢進する作用を有し、細胞内の活性酸素代謝に関与するものと考えられた。
2.年齢依存性変化を示すDNase I活性を定量するための新規な高感度活性定量法を開発し、SRED/CAM法と命名した。これまでのDNase I活性測定法に比して本法は数百倍検出感度が高く、ヒト血清1μlを使用すると数十分以内に血清DNase I活性を再現性よく定量できた。従って、SRED/CAM法は臨床検査において有用な方法であると考えられた
3.ヒト脳下垂体において年齢依存性変化を示すDNase I活性を精査したところ、脳下垂体とは異なり血清に存在する酵素活性には年齢依存性が見られなかった。しかし、急性心筋梗塞患者では発症に伴い血清DNase I活性が有意に上昇することを見出した。急性心筋梗塞発症直後に血清酵素活性が上昇し、約3時間後に最大値となり、その後活性が減少した。これまで心筋梗塞の診断に利用されてきた生化学的マーカーでは発症後数時間経過しないと変動を示さず、従って血清DNase Iは急性心筋梗塞の急性期の診断マーカーになりうるものと考えられた。今後、その変動のメカニズムを解明する予定である。
4.我々がこれまでに見出した若年者特異的な年齢依存性マーカーであるUgl-Yについて、その部分一次構造を決定した。

Research Products

• [Publications] T.Yasuda: "A simple method of DNA extraction and STR typing from urine samples using a commercially available DNA/RNA extraction kit"J.Forensic Sci.. 48・1. 108-110 (2003)
• [Publications] T.Yasuda: "A single amino acid substitution of Leu130Ile in snake DNase I contributes to the acquisition of thermal stability"Eur.J.Biochem.. 270・2. 307-314 (2003)
• [Publications] R.Iida: "M-LP, Mpv17-like Protein, has a peroxisomal membrane targeting signal comprising a transmembrane domain and a positively charged loop and up-regulates expression of the manganese superoxide dismutase gene"J.Biol.Chem.. 278・8. 6301-6306 (2003)
• [Publications] T.Nakajima: "Production of murine monoclonal anti-human DNase II antibodies, and their use for immunoaffinity purification of DNase II from human liver and urine"Legal Med.. 5・Suppl.1. s214-s216 (2003)
• [Publications] K.Mogi: "Carp hepatopancreatic DNase I"J.Biochem.. 133・3. 377-386 (2003)
• [Publications] T.Yasuda: "Usefulness of deoxyribonuclease I (DNase I ) polymorphism for individualization from small aged urine stains"Legal Med.. 5・2. 105-107 (2003)
• [Publications] R.Iida: "A novel multiplex PCR system consisting of Y-STRs DYS441, DYS442, DYS443, DYS444 and DYS445"J.Forensic Sci.. 48・5. 1088-1090 (2003)
• [Publications] M.Yoshida: "An abrupt elevation of the serum deoxyribonuclease I (DNase I ) activity in acute myocardial infarction"Circulation J.. 67・Suppl.1. 300 (2003)
• [Publications] K.Mogi: "Case report : food poisoning to death by Podostroma cornu-damae, its case history and autopsy findings"Acta Grim.Japon. 69・1. 14-20 (2003)
• [Publications] Y.Kaneko: "Molecular, biochemical and immunological analyses of canine pancreatic DNase I"J.Biochem.. 134・5. 711-718 (2003)
• [Publications] H.Takeshita: "Rapid quantification of DNase I activity in 1-mL serum samples using a cellulose acetate membrane and SYBR Green I"Clin.Chem.. (in press). (2004)
• [Publications] 中島たみ子: "ヒトDNase IIの多型はプロモーター領域のSNP(A-75G)によって発生した"DNA多型. 11. 230-234 (2003)
• [Publications] 飯田礼子: "マウス腎年齢依存性発現分子M-LPの細胞内局在と生理的機能"DNA多型. 11. 113-117 (2003)
• [Publications] 岸紘一郎: "DNase Iの遺伝的多型は消化器がんのリスクファクターである"日本がん検診・診断学会誌. 10・2. 61-63 (2003)
• [Publications] 安田年博: "ヒトDNase Iの遺伝子内に見出されたSNPと疾患との相関の検索"DNA多型. 12(印刷中). (2004)
• [Publications] 坪田悦子: "マウス脳の年齢依存性発現遺伝子"DNA多型. 12(印刷中). (2004)
• [Publications] 金古 康: "イヌDNase Iの精製と遺伝子クローニング"DNA多型. 12(印刷中). (2004)