2003 Fiscal Year Annual Research Report

表皮分化による自然免疫制御機構の解明

Research Project

Project/Area Number	15209035
Research Category	Grant-in-Aid for Scientific Research (A)
Research Institution	Ehime University
Principal Investigator	橋本公二愛媛大学, 医学部, 教授 (00110784)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	山崎研志愛媛大学, 医学部, 助手 (40294798) 白方裕司愛媛大学, 医学部, 助手 (50226320) 佐山浩二愛媛大学, 医学部, 助教授 (80187286) 一條秀憲東京大学, 大学院・薬学系研究科, 教授 (00242206)
Keywords	自然免疫 / 角化細胞 / 分化 / 抗菌ペプチド / ASK1 / 細菌 / MIP3α / 細胞内シグナル
Research Abstract	1.ASK1による角化細胞からの抗菌ペプチド(β-defensin 1-3,CAP18)および、MIP3-α産生の細胞内制御機構の解明アデノウイルスベクターを用いて活性型ASK1を培養角化細胞に遺伝子導入し、抗菌ペプチド(β-defensin 1-3,CAP18)、MIP3-αの産生をELISA法、Western blot法、Ribonuclease protection assay (RPA)法、リアルタイムPCR法にて検討した。その結果、ASK1導入により角化細胞はβ-defensin 1-3,CAP18,MIP3-αを誘導することが明らかになった。さらに、ASK1の下流にあるとされているJNK,p38MAPKのシグナル伝達経路の阻害剤を用いて誘導の阻害を試みた。その結果、p38の阻害剤でこれらの誘導が抑制されることが明らかになった。 2.角化細胞が産生する抗菌ペプチドの細菌に対する作用機序の解明 (1)抗菌活性の検討:β-defensin 1-3,およびCAP18の合成ペプチドを作製し、種々の濃度の合成ペプチドと黄色ブ菌を2時間作用後、寒天培地にまき、コロニー数をカウントした。その結果、これらの抗菌ペプチドは黄色ブドウ球菌に対して、抗菌活性を有し、その抗菌活性は、CAP18、hBD-3、hBD-2、hBD-1の順であった。 (2)角化細胞における抗菌ペプチド発現の検討:正常ヒト角化細胞をconfluentまで培養し、菌を68℃、1時間処理した加熱死菌を10^8/mlになるよう培養液に添加し、種々の時間接触させた。その後、細胞からRNAを抽出しReal-Time PCR法で各々の抗菌ペプチドmRNAの発現を検討した。その結果、黄色ブドウ球菌の接触によりhBD-2,CAP18が誘導されることが明らかになった。 3.セルフリー蛋白合成システムを用いたタンパク合成セルフリー蛋白合成システムを用いて、ヒトのASK1合成を試みた。その結果、SDS-PAGEにて、ASK1のバンドを検出することができ、ASK1の産生を確認することができた。

Research Products

(7 results)

All Other

All Publications (7 results)

[Publications] Shirakata Y.: "So-called biological dressing effects of cultured epidermal sheets are mediated by the production of EGF family, TGF-b and VEGF"J Dermatol Sci. 32. 209-215 (2003)
[Publications] Shirakata Y: "Severe Palmo-plantar Hyperkeratosis in Koebner Epidermolysis Bullosa Simplex"J Dermatol. 30. 135-140 (2003)
[Publications] Yamasaki K: "Keratinocyte growth inhibition by high-dose epidermal growth factor is mediated by transforming growth factor-b"J Invest Dermatol. 120. 1030-1037 (2003)
[Publications] Yamasaki K: "SOCS1/JAB and SOCS3/CIS3 negatively regulate the STATs signaling pathway in normal human epidermal keratinoctyes"J Invest Dermatol. 120. 571-580 (2003)
[Publications] Yahata Y: "Nuclear translocation of phosphorylated STAT3 is essential for VEGF-induced human dermal microvascular endothelial cell migration and tube formation"J Biol Chem. 278. 40026-40031 (2003)
[Publications] Tsuda T: "Lack of evidence for TARC/CCL17 production by normal human keratinocytes in vitro"J Dermatol Sci. 31. 37-42 (2003)
[Publications] 橋本公二: "皮膚科診療プラクティス"浅井宏祐. 6 (2003)

2003 Fiscal Year Annual Research Report

表皮分化による自然免疫制御機構の解明

Principal Investigator

橋本 公二 愛媛大学, 医学部, 教授 (00110784)

Research Products

[Publications] Shirakata Y.: "So-called biological dressing effects of cultured epidermal sheets are mediated by the production of EGF family, TGF-b and VEGF"J Dermatol Sci. 32. 209-215 (2003)

[Publications] Shirakata Y: "Severe Palmo-plantar Hyperkeratosis in Koebner Epidermolysis Bullosa Simplex"J Dermatol. 30. 135-140 (2003)

[Publications] Yamasaki K: "Keratinocyte growth inhibition by high-dose epidermal growth factor is mediated by transforming growth factor-b"J Invest Dermatol. 120. 1030-1037 (2003)

[Publications] Yamasaki K: "SOCS1/JAB and SOCS3/CIS3 negatively regulate the STATs signaling pathway in normal human epidermal keratinoctyes"J Invest Dermatol. 120. 571-580 (2003)

[Publications] Yahata Y: "Nuclear translocation of phosphorylated STAT3 is essential for VEGF-induced human dermal microvascular endothelial cell migration and tube formation"J Biol Chem. 278. 40026-40031 (2003)

[Publications] Tsuda T: "Lack of evidence for TARC/CCL17 production by normal human keratinocytes in vitro"J Dermatol Sci. 31. 37-42 (2003)

[Publications] 橋本公二: "皮膚科診療プラクティス"浅井 宏祐. 6 (2003)

橋本公二愛媛大学, 医学部, 教授 (00110784)

[Publications] 橋本公二: "皮膚科診療プラクティス"浅井宏祐. 6 (2003)