TAT-Cre融合タンパク投与による生体遺伝子組み換え誘導方法の確立と実用化

2003 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 15300140
• Research Institution: Kyoto University
• Principal Investigator: 山田 秀一 京都大学, ウイルス研究所, 助手 (20261133)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 後藤 一雄 (財)実験動物中央研究所, 遺伝研究室, 主任研究員 (00205593) ; 近藤 科江 京都大学, 医学部, 助手 (40314182) ; 酒巻 和宏 京都大学, 大学院・生命科学研究科, 助教授 (20271017)
• Keywords: コンデショナル / トランスジェニック / 遺伝子組み換え / マウス

Research Abstract

生体における遺伝子組み換えを行う目的で、生細胞を自由に出入りするユニークな性質を持つHIV由来のTATタンパクと大腸菌由来の組み換えタンパクのCreとの融合タンパクを作製、以下に示すリポーターマウスにダイレクトにタンパクを投与し、生体内での遺伝子組み換えを検討した。リポーターマウスとして、組み換えが起きていない場合にはGFP〔またはRFP〕を発現し、組み換えの起きたところではRFP〔GFP〕が発現するトランスジェニックマウスを作製使用した。
リポーターマウスはトランスジェニックの特質(弱点)とも取れるマルチコピーインテグレイトによる弊害によって同一個体内の部位(臓器)さらに同一臓器内における細胞において、必ずしもTAT-Creによる組み替えのおきたものすべてが同一の組み換えがおこらないことが示唆された。また個々の臓器においてもTAT-Creの浸潤性の違いによって、組み替えのおこりやすい臓器とおきにくい臓器が観察され、現在この点を改良すべくTAT-Creのデリバリーシステムの改良とタンパクの改良を検討中である。また、リポーターマウスについても、リポーター遺伝子の再構築による高感度に遺伝子組み換え部位を検出可能なラインの作製、さらに非外科的かつリアルタイムに遺伝子組み換えがおきた部位を特定できるトランスジェニックマウスの作製を行っている。またES細胞を利用した1コピートランスジェニックを作製しこれまで作製したトランスジェニックマウスとの比較を試みている。

Research Products

• [Publications] Tadokoro Y, Yomogida K, Yagura Y, Yamada S, Okabe M, Nishimune Y.: "Characterization of histone H2A. X expression in testis and specific labeling of germ cells at the commitment stage of meiosis with histone H2A. X promoter-enhanced green fluorescent protein transgene"Biol Reprod.. 69・4. 1325-1329 (2003)
• [Publications] Tateya I, Nakagawa T, Iguchi F, Soo Kim T, Endo T, Yamada S, Kageyama R: "Fate of neural stem cells grafted into injured inner ears of mice"Neuroreport. 14・13. 1677-1681 (2002)
• [Publications] Inouye S, Katsuki K, Izu H, Fujimoto M, Sugahara K, Yamada S, others: "Activation of Heat Shock Genes Is Not Necessary for Protection by Heat Shock Transcription Factor 1 against Cell Death Due to a Single Exposure to High Temperatures"Mol Cell Biol. 23・16. 5882-5895 (2003)
• [Publications] Sakuma T, Higashibata Y, Kawahata H, Yamada S, Okabe M, Kitamura Y, Nomura S.: "Difference of osteopontin gene regulation between bone and kidney"J Orthop Sci. 197・9. 361-366 (2003)
• [Publications] Okazaki IM, Hiai H, Kakazu N, Yamada S, Muramatsu M, Kinoshita K, Honjo T.: "Constitutive expression of AID leads to tumorigenesis"J Exp Med.. 197・9. 1173-1181 (2003)
• [Publications] Shinae Kizaka-Kondoh, Masahiro Inoue, Hiroshi Harada, Masahiro Hiraoka: "Tumor hypoxia : a target for selective cancer therapy"Cancer Sci.. 94. 1021-1028 (2003)