2003 Fiscal Year Annual Research Report

顆粒膜細胞による卵黄膜タンパクの分泌動態と繊維形成機構の解明

Research Project

Project/Area Number	15380191
Research Category	Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
Research Institution	Shizuoka University
Principal Investigator	森誠静岡大学, 農学部, 教授 (90143411)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	笹浪知宏静岡大学, 農学部, 助手 (80322139)
Keywords	卵黄膜 / ウズラ / 卵巣 / 卵子 / タンパク分泌 / CHO細胞 / ZPC / ZP1
Research Abstract	1、繊維形成測定法の開発トリチウム標識ロイシンを含んだRPMI培養液で顆粒膜細胞を培養すると,トリチウムで標識されたZPCが細胞外へ分泌されるが,この状態では水溶性タンパクとして培養液に溶けていることを確かめた。次にこのZPCがZP1と会合してインビトロで繊維を形成する過程をトリチウムをトレーサーとして経時的に測定する方法を確立した。 2、分泌動態の観察トリチウム標識ロイシンを含んだ培養液で顆粒膜細胞を培養し,分泌に関する各種阻害剤を添加して,粗面小胞体,ゴルジ体,分泌顆粒,分泌小胞に貯留されたZPCおよびZPC前駆体の量をオートラジオグラフィーおよび免疫組織化学によって観察した。 3、ZP1とZPCの大量発現様々な点変異(site-directed mutagenesis)により改変したZP1遺伝子およびZPC遺伝子をCHO細胞にトランスフェクションし,N-結合またはO-結合糖鎖不含,N末端またはC末端ペプチド欠損,膜貫通領域欠損,プロセッシング酵素耐性などの変異タンパクを作製した。各種変異タンパクの分泌量を免疫沈降法によって定量するとともに,大量発現によってタンパクを効率良く回収することに成功した。 4、今後の研究の展開新たに開発した繊維形成測定法によってZP1とZPCの会合の程度を測定することができるようになったので,さまざまな点変異ZP1およびZPCの会合の程度を比較することによって繊維形成に必要なドメイン構造を特定する予定である。

Research Products
(6 results)

All Other

All Publications (6 results)

[Publications] Tomohiro Sasanami: "Asparagine-Linked Oligosaccaride-Independent Secretion of Egg Envelope Glycoprotein ZPC of the Japanese Quail (Coturnix japonica)."Comparative Biochemistry and Physiology. 134(3). 631-638 (2003)
[Publications] Tomohiro Sasanami: "Carboxy-Terminal Proteolytic Processing at a Consensus Furin Cleavage Site Is a Prerequisite Event for Quail ZPC Secretion."Biology of Reproduction. 68(5). 1613-1619 (2003)
[Publications] Tomohiro Sasanami: "Effect of Follicle-Stimulating Hormone on ZPC Protein Secretion by Quail Granulosa Layer."Animal Science Journal. 74(3). 217-222 (2003)
[Publications] Jianzhi Pan: "Stimulation of ZPC Production by Follicle-Stimulating Hormone in the Granulosa Cells of Japanese Quail (Coturnix japonica)"Journal of Poultry Science. 40(3). 202-211 (2003)
[Publications] Tomohiro Sasanami: "Variant of Perivitelline Membrane Glycoprotein ZPC of Japanese Quail (Coturnix japonica)Lacking Its Cytoplasmic Tail Exhibits the"Biology of Reproduction. 69(4). 1401-1407 (2003)
[Publications] Ahmed M.Hanafy: "Estrogen Receptor Binding of Xenoestrogens and Phytoestrogens in Japanese Quail (Coturnix japonica)."Journal of Poultry Science. 41(1). 30-37 (2004)

2003 Fiscal Year Annual Research Report

顆粒膜細胞による卵黄膜タンパクの分泌動態と繊維形成機構の解明

Principal Investigator

森 誠 静岡大学, 農学部, 教授 (90143411)

Research Products

[Publications] Tomohiro Sasanami: "Asparagine-Linked Oligosaccaride-Independent Secretion of Egg Envelope Glycoprotein ZPC of the Japanese Quail (Coturnix japonica)."Comparative Biochemistry and Physiology. 134(3). 631-638 (2003)

[Publications] Tomohiro Sasanami: "Carboxy-Terminal Proteolytic Processing at a Consensus Furin Cleavage Site Is a Prerequisite Event for Quail ZPC Secretion."Biology of Reproduction. 68(5). 1613-1619 (2003)

[Publications] Tomohiro Sasanami: "Effect of Follicle-Stimulating Hormone on ZPC Protein Secretion by Quail Granulosa Layer."Animal Science Journal. 74(3). 217-222 (2003)

[Publications] Jianzhi Pan: "Stimulation of ZPC Production by Follicle-Stimulating Hormone in the Granulosa Cells of Japanese Quail (Coturnix japonica)"Journal of Poultry Science. 40(3). 202-211 (2003)

[Publications] Tomohiro Sasanami: "Variant of Perivitelline Membrane Glycoprotein ZPC of Japanese Quail (Coturnix japonica)Lacking Its Cytoplasmic Tail Exhibits the"Biology of Reproduction. 69(4). 1401-1407 (2003)

[Publications] Ahmed M.Hanafy: "Estrogen Receptor Binding of Xenoestrogens and Phytoestrogens in Japanese Quail (Coturnix japonica)."Journal of Poultry Science. 41(1). 30-37 (2004)

森誠静岡大学, 農学部, 教授 (90143411)