2004 Fiscal Year Annual Research Report
精子形成細胞アポトーシスのミトコンドリアによる分子制御機構
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15390058
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| Research Institution | Nagasaki University |
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Principal Investigator |
小路 武彦 長崎大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 教授 (30170179)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
菱川 善隆 長崎大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 助教授 (60304276)
江島 邦章 長崎大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 講師 (30309984)
和泉 伸一 長崎大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 助手 (40264246)
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| Keywords | 精子形成細胞 / アポトーシス / ミトコンドリア / Bax / チトクロームC / TUNEL / 電気穿孔法 / 遺伝子導入 |
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| Research Abstract |
受精に伴う生命プログラムの初期化を理解する上で、生殖細胞特有の頻回なアポトーシス誘導からの回避機構の解明が必要であると思われる。特に体細胞分裂を繰り返す精粗細胞及び減数分裂を行う精母細胞ではアポトーシス頻度は高く、そのアポトーシスの誘導にはミトコンドリア関連蛋白であるBaxやチトクロームCの強発現並びに細胞内再配置の関与が強く示唆されている。そこで本研究では、正常及びエストロゲン様環境ホルモン物質投与による障害マウス精巣を用いてBax及び関連蛋白の細胞内動態を検討し、アポトーシス誘導制御とミトコンドリアとの機能的及び構造的関係を明らかにすることを目的とした。本年度は、引き続き正常成熟雄マウス並びにDES等を皮下投与した精子形成障害マウスモデルを作製し、その光顕用試料を用いてTUNEL染色を行い詳細な検討を重ねた結果、健常ではstage XI-XIIで認められるアポトーシスが障害精巣では異なるstageでも誘導され、特に高濃度ではFas系を介して誘導されることが示唆された。一方、ミトコンドリアの細胞内挙動を明らかにするため、正常精巣にpEYFP-Mitoをエレクトロポレーションで導入後、蛍光シグナルを共焦点レーザー顕微鏡で検討したところ、正常細胞ではチトクロームCとの共存が明らかであったが、アポトーシス精粗細胞ではミトコンドリアとBax及びチトクロームC局在とは一致しなかった。この結果は、アポトーシス誘導に際しミトコンドリアそれ自体の局在は変化せず、特定の蛋白のみが放出されることを示している。しかしながら、in vivoでの遺伝子導入ではシグナル出現の均一性に問題が認められたので、in vitroでの検討を行うため初代培養系の培養条件の検討を鋭意行っており、追って分離生殖細胞或いは精細管断片への遺伝子導入を行い、ミトコンドリアの精子形成過程に於ける局在変化を種々の分化段階で明らかにする予定である。
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Research Products
(7 results)
