口腔癌関連遺伝子群の独自開発DNAチップによる総合的同定ならびにクローニング

2003 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 15390608
• Research Institution: Chiba University
• Principal Investigator: 椎葉 正史 千葉大学, 大学院・医学研究院, 助手 (20301096)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 白澤 浩 千葉大学, 大学院・医学研究院, 教授 (00216194) ; 丹沢 秀樹 千葉大学, 大学院・医学研究院, 教授 (50236775) ; 関 直彦 千葉大学, 大学院・医学研究院, 助教授 (50345013) ; 瀧口 正樹 千葉大学, 大学院・医学研究院, 教授 (40179578)
• Keywords: マイクロアレイ / cDNA / 遺伝子発現プロファイリング / 口腔癌 / 扁平上皮癌 / 腺癌 / 遺伝子クローニング

Research Abstract

当教室で独自開発したcDNAマイクロアレイは、778種類の唾液腺由来cDNAクローンに、口腔扁平上皮由来cDNA libraryに含まれる1423極類のcDNAクローンのうち唾液腺由来cDNAクローンと重複のない1,237種類のクローンを加え、さらにコントロールとして36種類のcDNAを加えた、合計2201種類のcDNAクローンを搭載している。これらのマイクロアレイ上に搭載されたクローンは全てcDNA libraryに1対1対応した形で保有されている。しかも、これら2201種類のcDNAクローンのうち1,332クローンは完全長cDNAとしてcDNA libraryに存在している。このため、マイクロアレイにより特徴的な発現を示す遺伝子を特定するとすぐに、library中のcDNAクローンを取り出すことができる。このため、次のステップである遺伝子の機能解析(SiRNA、タンパク発現、抗体作成、ノックアウトマウス等)の研究に直接結びつけることができる。その結果、そこの遺伝子をクローニングしたのと同じ結果を、網羅的に多数の遺伝子に対して得ることができる。本システムを用いて口腔癌(扁平上皮癌、腺癌)に関連した遺伝子を多数同定し、その完全長cDNAを得ることを本研究の目的とした。本年は培養細胞株について遺伝子発現プロファイリングを行い、特異的な遺伝子を同定した上で完全長cDNA遺伝子を得た。得られた完全長cDNA遺伝子は、偏平上皮癌関連でInterleukin 1 β、Centaurin gamma 2、Adenylyl cyclase-associated protein、Rh type C glycoprotein、Spermine syntase、Copine 1 、Cytokeratin 13、Paired-like homeodomain transcription factor 1、Hypothetical protein FLJ20150、Small proline-rich protein、Cartilage link protein、G-protein alpha 15、Interleukin receptor antagonist、Transglutaminaseなどであり、腺系癌関連ではDecay accelerating factor for complement (CD55)、Inducible signaling pathway protein 2、Insulin-like growth factor binding protein 3、Fos-like antigen 1、Human vimentin gene、Immunogloblin heavy constant mu、T cell receptor beta chain、Dehydrogenase/reductase member 2、18S rRNA gene等であった。今後、実際の臨床材料において同様実験を行い、共通して特異的な発現パターンを示す遺伝子を特定し、libraryから完全長cDNAを抽出してその後の機能解析実験に役立てたい。

Research Products

• [Publications] Moriya T, Seki N, Shimada K, Kato M, Yakushiji T, Nimura Y, Uzawa K, Takiguchi M, Tanzawa H: "In-house cDNA microarray analysis of gene expression profiles involved in SCC cell lines"Int J Molecular Medicine. 12. 429-435 (2003)