2004 Fiscal Year Annual Research Report
1分子のフィラミンAの力学特性とアクチン/フィラミンA-ゲルの機能のメカニズム
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15510099
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| Research Institution | Shizuoka University |
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Principal Investigator |
山崎 昌一 静岡大学, 理学部, 助教授 (70200665)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
伊藤 忠直 京都大学, 理学研究科, 助教授 (90093187)
大橋 一世 千葉大学, 理学部, 教授 (90114248)
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| Keywords | アクチン / フィラミンA-ゲル / 巨大リボソーム / 秩序液体相 / 一分子の蛋白質の力学特性 / 膜分裂 / 原子間力顕微鏡 / 蛋白質と低分子の結合力 / ゲルの浸透圧応答 |
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| Research Abstract |
1、我々が開発したPEG-lipid法を用いて、アクチン/フィラミンAゲルを内部に含む秩序液体相(lo相)の脂質膜の巨大リポソーム(GUV)を高イオン強度下で作成することを試みた。GUV内で蛍光ラベルされたアクチンフィラメントを観察することができた。また、lo相のGUVと低濃度のリゾホスファチジルコリン(lyso-PC)の相互作用によりGUVにおいて膜分裂が誘起されることを発見し、そのメカニズムを提出したが、アクチン/フィラミンAゲルを内部に含むGUVではlyso-PCによる膜分裂が誘起されなかった。以上の結果は、アクチン/フィラミンAゲルを内部に含むlo相の脂質膜のGUVを高イオン強度下で作成することに成功したことと、アクチン/フィラミンAゲルがGUVの安定化に役立つことを示している。
自己消光する程度に蛍光ラベルしたフィラミンAを用いて巨大リポソーム内にアクチン/フィラミンA-ゲルを構築し、この巨大リポソームに種々の方法でずり応力を与え、その時のフィラミンAのアンフォールディングの有無を蛍光位相差顕微鏡を用いて調べる試みを行ったが、現在のところ方法論の問題もあり成功していない。
2、AFMによるフィラミンAのアクチン結合ドメイン(ABD)とF-アクチンの結合力の測定する目的で、まずチキンのフィラミンのABDを生産した。次に、測定の方法論の確立のために、AFMのカンチレバーの探針をアミノ化し、それをビオチンと共有結合させ、雲母上のlo相の脂質2分子膜中のビオチン脂質にアビジンが結合したものとその探針との相互作用をAFMにより調べ、ビオチンとアビジンの結合力の測定に成功した。
3、アクチンおよびアクチン/フィラミンA-ゲルの浸透圧応答を、非平衡統計熱力学の立場から理論的に考察した。
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