出芽酵母と分裂酵母をモデル系とした細胞極性の制御機構の解析

2003 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 15570169
• Research Institution: National Institute of Advanced Industrial Science and Technology
• Principal Investigator: 藤田 篤 独立行政法人産業技術総合研究所, 特許生物寄託センター, 主任研究員 (70357911)
• Keywords: 出芽酵母 / 分裂酵母 / 細胞極性 / 遺伝子破壊

Research Abstract

1.出芽酵母における細胞極性制御因子Rax1の解析を行った。Bud8やRax1などのGFP融合タンパク質を用いて、各種の細胞極性制御因子の局在性を蛍光顕微鏡にて観察した。その結果から、Rax1が、Bud8などのランドマークタンパク質を、正に制御していることが示唆された。
2.分裂酵母における細胞極性制御因子の同定を行うため、分裂酵母のゲノムにランダムな遺伝子破壊を行うためのライブラリーを作成した。ゲノムDNAを部分分解し、一旦、ゲノムライブラリーを作成した。その後、ゲノムからの回収を考えたoriginとマーカー(kanamicin耐性とhis3)を含むDNA断片を、このライブラリーのゲノム由来部分に挿入して、遺伝子破壊用ライブラリーを構築した。このライブラリーを用いて、遺伝子破壊を試みたところ、ゲノム由来の断片に、複製起点となる配列が多数あるためか、予想以上の数の形質転換体のコロニーが出現した。これらから、マーカーを指標にDNAを回収したところ、ゲノムに挿入されていないものが多数を占めていた。この結果から、分裂酵母におけるランダム遺伝子破壊株の単離には、出芽酵母で行われた方法をそのまま適用することが困難である事が判明した。
3.分裂酵母の高発現cDNAライブラリーを用いた実験から、PB1 domainを持つ新規因子を同定した。PB1 domainは、分裂酵母Scd1(出芽酵母Cdc24)、Scd2(出芽酵母Bem1)にも見られる。同定した遺伝子は、高発現すると細胞の増殖を著しく阻害し、また細胞形態は、丸い形へと変化した。

Research Products

• [Publications] A.Fujita, M.Lord, T.Hiroko, F.Hiroko, T.Chen, C.Oka, Y.Misumi, J.Chant: "Rax1, a protein required for the establishment of the bipolar budding pattern in yeast."GENE. 327(2). 161-169 (2004)