2004 Fiscal Year Annual Research Report
ミニ染色体を用いた、遺伝子導入のための、ヒト人工染色体ベクターの構築と応用
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15590293
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| Research Institution | University of the Ryukyus |
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Principal Investigator |
要 匡 琉球大学, 医学部, 助教授 (40264288)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
成富 研二 琉球大学, 医学部, 教授 (20101446)
柳 久美子 琉球大学, 医学部, 助手 (90294701)
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| Keywords | ヒト人工染色体 / BAC / X染色体 / 部位特異的組換え / 遺伝子治療 / DT40 / 相同組換え |
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| Research Abstract |
<ミニ染色体改変システムの構築と検証>
1)BAC(細菌人工染色体)導入システムの検証
テロメア断片化ベクターにより作成された約2.7MbのヒトX染色体由来ミニ染色体に、さらに改変を加え、反応方向特異性をもつ部位特異的組換え系(Cre/変異loxP)を用いたBAC導入システムを構築した。ヒトHPRT遺伝子を含む改変BAC(HPRTBAC66D2)をミニ染色体へ導入した場合の挿入効率は約75%であった。他のBAC(ヒトFactor IX遺伝子を含むF9BAC66D2)においても、効率は同程度(約80%)であった。ヒトHPRT遺伝子をもつミニ染色体は、挿入を行ったニワトリpre-B細胞株(DT40)において、遺伝子発現が認められた。よって、このシステムは、遺伝子全体をミニ染色体に挿入するシステムとして、有効であることが示された。(投稿中)
2)染色体ベクターとしての応用
改変(挿入)を行ったミニ染色体の、宿主細胞であるDT40から他の細胞への移入を行った。
ヒトHPRT遺伝子をもつミニ染色体を微小核融合法により、線維肉腫細胞亜株(HT1080,HPRT(-))へ移入した。G418耐性を指標にクローン(HT1080,HPRT(-))を検討したところ、ミニ染色体は、細胞あたりのコピー数に変動が見られる(1〜8コピー)ものの、安定に存在していた。また、HPRT遺伝子発現も効率よく認められた。よって、このミニ染色体は、遺伝子導入のための染色体ベクターとして有効であると考えられた。
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Research Products
(2 results)
