2003 Fiscal Year Annual Research Report
JNK選択的新規MKPのT細胞分化における役割と腫瘍・感染免疫における意義
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15590334
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| Research Institution | Kagoshima University |
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Principal Investigator |
松口 徹也 鹿児島大学, 大学院・医歯学総合研究科, 教授 (10303629)
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| Keywords | MKP-M / Th1 / Th2 / JNK / T細胞 / サイトカイン / MAPキナーゼ / アデノウィルス / CD4 |
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| Research Abstract |
JNKに強い基質特異性を示すMAPKフォスファターゼであるMKP-Mは、ナイーヴCD4陽性T細胞に少量発現される。in vitroでのTCR刺激による分化実験系において、Th2分化優位の条件下で発現量が増加し、逆にTh1分化優位の条件下ではその発現はほとんど認められなくなることから、MKP-MのTh1/Th2分化への関与が想定され、次の実験を行った。
1)ナイーヴBalb/cマウス脾臓よりCD4陽性T細胞を磁気ビーズにより単離し、野生型MKP-M、不活性型MKP-M(ドミナントネガティブ型)、およびコントロール用のアデノウィルスに感染させた後、CD3抗体で刺激し、Th1およびTh2分化条件下もしくはTh2分化条件下(IL-4+抗IL-12抗体)で培養し、経時的なサイトカイン(IFNγ、IL-4)、および転写因子(T-bet、Maf、GATA-3)の発現レベルを解析したところ、野生型MKP-Mの強制発現によりTh2タイプの分化が誘導され、逆に不活性型の強制発現でTh1優位の分化が誘導された。
2)T細胞でのみ活性化されるLck遺伝子のプロモーターを含む野生型および不活性型のMKP-M発現プラスミドを作製し、B57BL/6マウス受精卵に注入して、それぞれのMKP-MタイプのT細胞特異的なトランスジェニックマウスを作成した。不活性型の高い発現を示したマウスでは胸腺内T細胞分化が著しく抑制された。現在これらのマウスの卵白アルブミン感作、リーシュマニア感染、およびメラノーマ接種等のモデルを確立し、コントロールマウスの間で比較検討中である。
3)マウスMKP-M遺伝子を単離し、その転写調節領域の解析を行ったところ、E-BoxおよびCRE配列が重要な役割を果たしていることが明らかになった。またMKP-M遺伝子ターゲット用プラスミドを作成し、MKP-M遺伝子ヘテロ型欠損ES細胞を確立した。
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Research Products
(6 results)
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[Publications] Musikacharoen, T., Yoshikai, Y., Matsuguchi, T.: "Histone acetylation and activation of CREB regulate transcriptional activation of MKP-M in LPS-stimulated macrophages."J.Biol.Chem.. 278. 9167-9175 (2003)
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[Publications] Matsuguchi, T., Masuda, A., Sugimoto, K., Nagai, Y., Yoshikai, Y.: "JNK-interacting protein 3 associates with Toll-like receptor 4 and is involved in LPS-mediated JNK activation."EMBO J.. 22. 4455-4464 (2003)
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[Publications] Hiromatsu, T., Matsuguchi, T., Shimizu, H.Yajima, T.et al.: "NKT cells stimulated with a ligand for TLR2 at least partly contribute to liver injury caused by Escherichia coil infection in mice. 33 2511-2519"Eur.J.Immunol.. 33. 2511-2519 (2003)
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[Publications] Matsuguchi, T., Takagi, A., Matsuzaki, T., Nagaoka, M.et al.: "Lipoteichoic Acid of Lactobacillus Elicits Strong TNFα-inducing Activivty on Macrophages through Toll-like Receptor 2."Clin Diagn Lab Immunol.. 10. 259-266 (2003)
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[Publications] Hiromatsu, T., Yajima, T., Matsuguchi, T., Nishimura, H.et al.: "Overexpression of IL-15 protects against Escherichia coli-induced shock accompanied by inhibition of TNF-α-induced apoptosis."J.Infectious Disease.. 187. 1442-1451 (2003)
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[Publications] Kikuchi, T., Yoshikai, Y., Miyoshi, J., Matsuguchi, T.et al.: "Cot/Tpl2 is essential for RANKL induction by lipid A in osteoblasts."J.Dental Res.. 82. 546-550 (2003)
