リバースジェネティクスを用いたパラミクソウイルスV蛋白の機能解析

2003 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 15590416
• Research Institution: Mie University
• Principal Investigator: 西尾 真智子 三重大学, 医学部, 助手 (70156040)
• Keywords: hPIV2 / V蛋白 / ウイルス増殖 / Tryptophan-rich-motif / Cysteine-rich-domain / 抗インターフェロン活性 / STAT蛋白 / レコンビナントウイルス

Research Abstract

1.パラインフルエンザ2型ウイルス(hPIV2)のV蛋白に変異を入れた変異V蛋白を発現しているHeLa細胞株を樹立し、抗インターフェロン(IFN)活性、STAT蛋白の減少を検討した。V蛋白特異的領域にあるSTAT蛋白との結合部位であるTryptophan-rich-motifに変異を入れたV蛋白、各パラミクソウイルスで保存されている7つのどのCysteineに変異を入れたV蛋白も抗IFN活性を示さず、STAT蛋白の減少も見られなかった。またP/V共通領域では143番目のPhenylalanineがSTAT蛋白減少に重要である事がわかった。
2.Tryptophan-rich-motifの3つのTryptophanに種々の組み合わせで変異を入れたV蛋白を作製し、STAT蛋白との結合を検討した。3つの内2つ以上あればSTAT蛋白と結合でき、抗IFN活性、STATの減少が見られた。
3.V蛋白のウイルス増殖への影響を検討するためEditingの配列を壊し、V蛋白を持たないレコンビナントPIV2を作製した。IFN産生能がないVero細胞においても極めて増殖が悪くV蛋白は抗IFN活性以外にウイルス増殖に関与している事が明らかになった。またV蛋白特異的領域にあるTryptophan-rich-motif、Cysteineに変異を入れたV蛋白を持つレコンビナントウイルスも増殖が悪く、V蛋白特異的領域はV蛋白のウイルス増殖に関与している事が明らかとなった。しかし、P/V共通領域の143番目のPhenylalanineに変異を入れたV蛋白を持つウイルスはVero細胞においてSTAT蛋白を減少させないが、ウイルスの増殖はwtと変わらない。このアミノ酸の変異はSTAT蛋白の減少には重要であるがウイルス増殖には関与していない。

Research Products

• [Publications] Machiko Nishio: "Characterization of Sendai virus persistently infected L929 cells and Sendai virus pi strain : Recombinant Sendai virus having Mpi protein shows lower cytotoxicity and are incapable of establishing persistent infection"Virology. 314・1. 110-124 (2003)
• [Publications] Yuji Kozuka: "Identification of amino acids essential for the human parainfluenza type2 virus V protein to lower the intracellular levels of the STAT2"Virology. 317・2. 208-219 (2003)
• [Publications] Kouki Mori: "The functional interaction between CD98 and CD147 in regulation of virus-induced cell fusion and osteoclast formation"Medical Microbiology and Immunology. (in press).