2003 Fiscal Year Annual Research Report

低分子化した混合斑痕試料に有用なマルチプレックス型判定システムの構築及び評価

Research Project

Project/Area Number	15590577
Research Institution	Nagoya University
Principal Investigator	山本敏充名古屋大学, 大学院・医学系研究科, 助教授 (50260592)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	玉木敬二京都大学, 大学院・医学研究科, 教授 (90217175) 打樋利英子名古屋大学, 大学院・医学系研究科, 助手 (20223571) 勝又義直名古屋大学, 大学院・医学系研究科, 教授 (30109326)
Keywords	STR / 混合斑痕 / マルチプレックス / 低分子化DNA / 日本人 / 遺伝的多型
Research Abstract	本年度は、"stutter band"が小さいとされている5塩基リピートの常染色体上のSTRのうち、市販の個人識別用STR増幅・型判定キットに含まれる4塩基リピートのSTRローカスとは少なくとも染色体のアームを異にし、文献上で日本人におけるヘテロ接合度が0.8以上のPenta E、Penta D、D10S2325ローカス及び、データベース検索により得られた第14染色体上のSTR (D14:仮名)を選択した。低分子化したDNA試料にも応用可能にするため、増幅産物が200bp以下になるように各ローカスで数種類のプライマーを設計した。銀染色法により最適と考えられたプライマーセットにおいて、4種類の蛍光色素を標識した。これらの蛍光標識プライマーによりマルチプレックスPCRを行い、そのPCR増幅産物を解析して、マルチプレックスPCRの条件決定を試みた。また、これら4ローカスについて、日本人96名のDNAサンプルから、キャピラリー電気泳動法あるいは銀染色法により型判定し、各ローカスのアレル頻度を算出し、ハーディ・ワインベルグ平衡からの乖離を検定したところ、乖離は観察されなかった。これらの頻度分布から算出された各ローカスのヘテロ接合度は、PE、D14、PD、D10で、0.9160、0.8330、0.8229、0.8125で、いずれも0.8以上の高い値であった。しかしながら、4ローカスのマルチプレックス化を新たにプライマー設計するなど種々試みたが、D14が非常に悪影響を与えることが判明したので、最終的にD14を除いたマルチプレックスを組むことに決定し、現在D14に代わる新たなローカスを選択している段階である。今後、PE、PD、D10については、日本人で観察された全アレルから塩基配列決定後、アレリックラダーを作成し、新たなローカスを加えたマルチプレックスシステムを構築・評価する予定である。

Research Products

(5 results)

All Other

All Publications (5 results)

[Publications] R.Kurihara: "Mutations in 14 Y-STR loci among Japanese father-son haplotypes"Int.J.Legal Med.. 118(in press). (2004)
[Publications] T.Yoshimoto: "A novel fluorescent quadruplex STR typing system and the allele frequency distributions in a Thai population"J.Forensic Sciences. 48. 116-121 (2003)
[Publications] R.Uchihi: "Haplotype analysis with 14 Y-STR loci using 2 multiplex amplification and typing systems in 2 regional populations in Japan"Int.J.Legal Med.. 117. 34-38 (2003)
[Publications] T.Yamamoto: "Population database and mutation study for short tandem repeat loci on Y-chromosome (Y-STRs) in Japanese populations"Forensic Sci.Rev.. 15. 171-178 (2003)
[Publications] 打樋利英子: "低分子化DNA試料に有用な新しいY-STR quadruplexタイピングシステム"DNA多型. 11. 178-180 (2003)

2003 Fiscal Year Annual Research Report

低分子化した混合斑痕試料に有用なマルチプレックス型判定システムの構築及び評価

Principal Investigator

山本 敏充 名古屋大学, 大学院・医学系研究科, 助教授 (50260592)

Research Products

[Publications] R.Kurihara: "Mutations in 14 Y-STR loci among Japanese father-son haplotypes"Int.J.Legal Med.. 118(in press). (2004)

[Publications] T.Yoshimoto: "A novel fluorescent quadruplex STR typing system and the allele frequency distributions in a Thai population"J.Forensic Sciences. 48. 116-121 (2003)

[Publications] R.Uchihi: "Haplotype analysis with 14 Y-STR loci using 2 multiplex amplification and typing systems in 2 regional populations in Japan"Int.J.Legal Med.. 117. 34-38 (2003)

[Publications] T.Yamamoto: "Population database and mutation study for short tandem repeat loci on Y-chromosome (Y-STRs) in Japanese populations"Forensic Sci.Rev.. 15. 171-178 (2003)

[Publications] 打樋利英子: "低分子化DNA試料に有用な新しいY-STR quadruplexタイピングシステム"DNA多型. 11. 178-180 (2003)

山本敏充名古屋大学, 大学院・医学系研究科, 助教授 (50260592)