2003 Fiscal Year Annual Research Report
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15590863
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| Research Institution | Nihon University |
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Principal Investigator |
福田 昇 日本大学, 医学部, 講師 (40267050)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
松本 紘一 日本大学, 医学部, 教授 (00125064)
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| Keywords | PDGF-A鎖 / TGF-β1 / リボザイム / アデノウイルス / 慢性腎炎 |
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| Research Abstract |
1.PDGF-A鎖mRNAおよびTGF-β1 mRNAに対するDNA/RNAキメラ型リボザイムの合成
RNase耐性のため、リボザイムの酵素活性をもった保存配列のみRNA構造とし、他をDNA構造とし、3'末端の2塩基をphosphorothioate型に化学修飾したDNA/RNAキメラ型リボザイムをRNA、DNAシンセサイザーを用いて合成し、HPLCにて精製した。
2.PDGF-A鎖mRNAおよびTGF-β1 mRNAに対するリボザイム発現アデノウイルスの構築
コスミドベクターへPDGF-A鎖mRNAおよびTGF-β1 mRNAに対するリボザイムの鋳型DNAを挿入する。構築したコスミドの大量調製し、制限酵素処理済みDNA-TPCとを293細胞にco-transfectionした。目的の組換えウイルスが得られたかどうか確認を行った後、組換えウイルスを293細胞に感染させて高力価ウイルス液を得、力価測定し保存した。
3.腎メサンジウム細胞培養
メサンジウム細胞を分離、培養し、基礎レベルでtotal RNAを抽出し、PDGF-A鎖およびTGF-β1 mRNA発現をRT-PCR法にて測定した。
4.生体内分解型ゼラチンによるリボザイムのデリバリーの検討
PDGF-A鎖mRNAおよびTGF-β1 mRNAに対するDNA/RNAキメラ型リボザイムをFITCラベルし、1μgを生体分解型ゼラチンと30分インキュベートしリボザイムを包埋する。培養腎メサンジウム細胞に0.1μMリボザイムのみ、リボザイム+ゼラチンをインキュベートし、細胞への取り込み効率を比較した。
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Research Products
(7 results)
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[Publications] Kotani M, Fukuda N, et al.: "Chimeric DNA-RNA hammerhead ribozyme targeting to PDGF A-chain mRNA specifically inhibited neointimal formation of rat carotid artery after balloon"Cardiovascular Research. 57. 265-276 (2003)
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[Publications] Hu WY, Fukuda N, et al.: "Homogenous cultures of human-derived vascular smooth muscle cells produce angiotensin II by changing to the synthetic phenotype."Journal of Cell Physiology. 196. 284-292 (2003)
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[Publications] Fukuda N, Furuya R et al.: "Effects of antisense PNA to PDGF A-chain on growth of vascular smooth muscle cells."Journal of Cardiovascular Pharmacology. 42. 224-231 (2003)
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[Publications] Bando T, Iida H, Tao ZF, Narita A, Fukuda N, et al.: "Sequence specificity, reactivity, and antitumor activity of DNA-alkylating pyrrole-imidazole diamides."Chemical Biology. 10. 751-758 (2003)
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[Publications] Ando H, Fukuda N, et al.: "Chimeric DNA-RNA hammerhead ribozyme targeting TGF-β1 mRNA inhibits neointima formation in rat carotid artery after balloon injur"European Journal of Pharmacology. 483. 207-214 (2004)
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[Publications] Ikeda Y, Fukuda N, et al.: "Development of angiogenic cell and gene therapy by transplantation of umbilical cord blood with vascular endothelial growth factor gene."Hypertension Research. 27. 119-128 (2004)
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[Publications] 横山真一郎, 福田 昇: "血管の発生と新生-基礎と臨床-"メディカルレビュー社. 12 (2003)
