ドパミン神経幹細胞の増殖・分化シグナルの制御とパーキンソン病治療への応用

2004 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 15590890
• Research Institution: Tottori University
• Principal Investigator: 竹島 多賀夫 国立大学法人鳥取大学, 医学部, 講師 (20206973)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 中曽 一裕 国立大学法人鳥取大学, 医学部・附属病院, 医員 (30379648) ; 福原 葉子 江津済生会病院, 神経内科, 医長
• Keywords: 神経幹細胞 / ドパミン神経 / D- β hydroxybutyrate / GAPDH / ブロテアソーム

Research Abstract

中脳由来神経幹細胞をすでに確立した方法で大量に培養し,凍結保存した.
各種増殖条件・分化条件においてRNAを回収しnestin, nurr-1,Pax, Wntなどの部位関連のマーカーシグナル,FGF-2,-8,-R3,shh等の増殖関連シグナル,およびドパミン神経のマーカーとしてTH, DAを解析した.同時に蛍光免疫染色によりnestin, MAP-2,TH, GABA, A2B5,vimentin, GFAPなどのマーカーを解析した.昨年度までに明らかにした分化条件(fibronectin, forskolin, dopamine, BDNF)に加え,レチノイン酸と神経保護物質としてD- β hydroxybutyrate (DBHB)の効果と影響を上記マーカーを用いて比較した.
また,H15年度にプロテアソーム阻害がドパミン神経細胞の変性をきたす際にGAPDHの過剰発現が関与することを見出し報告したが,GAPDHの過剰発現がPDの病理学的マーカーであるLewy小体の形成に関与することを明らかにし(Eur J Neurosci 2005),またp62/A170/ZlPの転写活性の変化の関与を示した(Nakaso K, et al. Brain Res 2004).さらにDBHBの細胞に対する効果を検討するためドパミン系神経芽細胞腫であるSH-SY5Y細胞をレチノイン酸により分化誘導を行ったモデルを用いて検討した.DBHBは分化誘導中SH-SY5Y細胞のロテノン毒性モデルにおいてミトコンドリアを介して神経細胞保護をする機構を明らかにした(Imamura, Takeshima, Kashiwaya, et al. Socety for Neurosoience 2004,#1013.15.)これらの成果をふまえ次年度はTH-GFPの導入効率について検討し分化誘導法シグナルの制御を検討する予定である.

Research Products

• [Journal Article] Pro-apoptotic protein glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase promotes the formation of Lewy body-like inclusions. (2005)
  • Author(s): Tsuchiya K, Tajima H, Kuwae T, Takeshima T, Nakano T, Tanaka M, Sunaga K, Fukuhara Y, Nakashima K, Ohama E, Mochizuki H, Mizuno Y, Katsube N, Ishitani R.
  • Journal Title: Eur J Neurosci 21・2 Pages: 317-326
• [Journal Article] Transcriptional activation of p62/A170/ZIP during the formation of the aggregates : possible mechanisms and the role in Lewy body formation in Parkinson's disease. (2004)
  • Author(s): Nakaso K, Yoshimoto Y, Nakano T, Takeshima T, Fukuhara Y, Yasui K, Araga S, Yanagawa T, Ishii T, Nakashima K.
  • Journal Title: Brain Res 1012・1-2 Pages: 42-51
• [Journal Article] A haplotype of the methylenetetrahydrofolate reductase gene is protective against late-onset Alzheimer's disease. (2004)
  • Author(s): Wakutani Y, Kowa H, Kusumi M, Nakaso K, Yasui K, Isoe-Wada K, Yano H, Urakami K, Takeshima T, Nakashima K.
  • Journal Title: Neurobiol Aging 25・3 Pages: 291-294
• [Journal Article] The Regulatory Region Polymorphisms of the MTHFR Gene Are Not Associated with Alzheimer's Disease. (2004)
  • Author(s): Wakutani Y, Kowa H, Kusumi M, Nakaso K, Isoe-Wada K, Yano H, Urakami K, Takeshima T, Nakashima K.
  • Journal Title: Dement Geriatr Cogn Disord 17・3 Pages: 147-150