2003 Fiscal Year Annual Research Report
GNE遺伝子異常に伴う遠位型ミオパチーの発症機構の解明
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15590898
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| Research Institution | 大分医科大学 |
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Principal Investigator |
熊本 俊秀 大分大学, 医学部, 教授 (40134936)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
荒川 竜樹 大分大学, 医学部, 助手 (90363548)
上山 秀嗣 大分大学, 医学部, 講師 (20281214)
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| Keywords | 遠位型ミオパチー / rimmed vacuoles / lysosome system / GNE / 遺伝子組み換え蛋白 / Apg遺伝子 / 細胞モデル / SiRNA法 |
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| Research Abstract |
我々は、縁取り空胞を伴う遠位型ミオパチー(distal myopathy with rimmed vacuoles ; DMRV)の成因にlysosome系列の異常が関与していることを示唆してきたが、DMRVと同様に筋線維内にrimmed vacuole (RV)を多数認める封入体筋炎(IBM)についてlysosome関連蛋白であるmannose 6-phosphate receptor, clathrin及びautophagyに関与するhApg5,hApg12遺伝子を検討し、これらの蛋白やmRNAが本症で有意に増加し、DMRV筋と同様にRVミオパチーでは、lysosome系列が亢進していることを明らかにした(Kumamotoら,2004)。
最近、DMRVの原因遺伝子がUDP-N-acetylglucosamine-2-epimerase/N-acetylmannosaminekinase(GNE)であると同定され、本症の発症機構におけるGNEの役割を明らかにする目的で、GNE遺伝子異常とRVの過剰形成およびlysosome系列の異常との関係を明らかにするため、GNE遺伝子異常をもつ細胞モデル作成を行っている。まず、GNE遺伝子組み換え蛋白を作成を行った。すなわち、制限酵素認識配列を付加したprimer(5'側:BamH-I、3'側:Xho-1)を用いてラット筋よりRT-PCRを行い、得られたGNEはepimerase domainより557bp, kinase domainより772bpの部分である。遺伝子は、pGEM-T easyベクターにligationし、大腸菌JM109に形質転換後、TA-cloningを行った。目的遺伝子をGST癒合蛋白発現ベクターpGEX4T-3にligationし、大腸菌BL21に形質転換後、蛋白発現を誘導し、47kDaと56kDaの目的蛋白を得た。現在、モノクロナール抗体作成中で、続いてSiRNA法を用いて細胞モデルを構築し、目的の病態解析を行う。
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Research Products
(1 results)
