2004 Fiscal Year Annual Research Report
Tecチロシンキナーゼファミリーによる造血システム制御機構の解明
| Project/Area Number |
15591023
|
|---|
| Research Institution | Jichi Medical School |
|---|
Principal Investigator |
山下 義博 自治医科大学, 医学部, 助手 (10326861)
|
|---|
| Keywords | Tecチロシンキナーゼ / チロシンリン酸化 / Sakセリンスレオニンキナーゼ / PEST配列 |
|---|
| Research Abstract |
Tecチロシンキナーゼのキナーゼドメインをbaitとした酵母のtwo-hybridスクリーニング法によって単離されたSakセリン・スレオニンキナーゼはPlk/Poloファミリーに属する蛋白質である。Sakは970アミノ酸からなる蛋白質でそのN末端側にキナーゼドメインをもつ。Sak蛋白質は細胞増殖や、細胞分裂機構に関与する可能性が示唆されていたが、これまでSakキナーゼの活性制御機構は明らかにされてはいなかった。我々はまずSakとTec蛋白質の相互作用を明らかにする目的でSakがTecの基質となりうるか検討した。その結果293細胞内でSakはTecにより効率よくチロシンリン酸化されるのみならず、セリン残基やスレオニン残基が優先的にリン酸化されていることが明らかになった。このことはTecによりチロシンリン酸化されたSak蛋白質が活性化している可能性を示唆した。我々は実際にin vitroの実験でTecとの共発現によりSakのキナーゼ活性が著しく上昇することを確認した。我々はTecとの共発現によりSak遺伝子発現量は一定であるにもかかわらず細胞内Sak蛋白質量が著しく増加することを確認した。Sak蛋白質にはアミノ酸構造上2ヶ所のPEST配列が存在し、この配列を有する蛋白質は細胞内で早期に蛋白分解を受けることが明らかになっている。つまりTecによりチロシンリン酸化されたSak蛋白質はPEST依存性の蛋白分解機構から逃れ、その結果キナーゼ活性を維持することが出来るのではないかと考えられた。一方Tec以外の他のTecファミリーキナーゼはSakによって活性化されなかった。以上よりSakはTec特異的なセカンドメッセンジャーとして造血システム維持に関与する可能性が明らかになった。
|
