変異aprataxin cDNA 導入培養ラット末梢神経における軸索障害

2003 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 15591119
• Research Institution: Sapporo Medical University
• Principal Investigator: 舘 延忠 札幌医科大学, 保健医療学部, 助教授 (80136944)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 小塚 直樹 札幌医科大学, 保健医療学部, 助教授 (90225459) ; 山下 利春 札幌医科大学, 医学部, 助教授 (50167706)
• Keywords: aprataxin cDNA / 培養ラット末梢神経 / 689insT / 軸索変性

Research Abstract

Friedrich失調症に類似し小脳萎縮、末梢神経障害、眼球運動失行、低アルブミン血症を示す疾患をKoeingらとの共同研究で原因遺伝子aprataxinを同定した。EOCA-HA6例全てにaprataxin遺伝子変異689insTをhomozygoteに見いだした。今回見いだされたaprataxin遺伝子変異689insTが末梢神経の発生過程で軸索変性への関与を培養神経系を用いてaprataxin遺伝子および蛋白発現を解析することを目的とした。689insT変異aprataxin cDNAの作製はPCRによるsite-directed mutagenesis法を用い689insT変異aprataxin cDNAを得た。組み換えアデノウイルス作製はGrahamらの系を用い野生型と689insT変異apratxin cDNAが挿入されたアデノウイルベクターを得た。ラット培養神経細胞の作製は、胎生16日の胎児ラツトの後根神経節を用いた。髄鞘形成は坑Po抗体を用いてavidin-biotin-peroxidase法にて確認した。培養神経細胞に689insT変異aprataxin cDNAを組み込んだアデノウイルスと野生型aprataxin cDNAを組み込んだアデノウイルスを感染させ、培養神経細胞の軸索の微細構造は電顕を用いて解析し、抗aprataxin抗体を用いた免疫組織化学とwestern blotにてaprataxin蛋白の発現を解析する。

Research Products

• [Publications] 菊池真, 舘 延忠ら: "父親由来小児筋緊張性ジストロフィーに関する研究"札幌医科大学保健医療学部紀要. 6. 43-48 (2003)
• [Publications] 小塚直樹, 舘 延忠ら: "黒龍江省小児脳性麻痺防防治療中心における肢体不自由療育の現状"札幌医科大学保健医療学部紀要. 6. 87-91 (2003)
• [Publications] 小塚直樹, 舘 延忠ら: "筋強直性ジストロフィー症CTGリピートのNon-RI PCRサザン法に"脳と発達. 35. 380-387 (2003)
• [Publications] Uchida E, Tachi N et al.: "Molecular genetic analysis of X-linked recessive myotubular myopathy"Bulletin of School of Health Sciences, Sappro Medical University. 6. 49-58 (2003)