2004 Fiscal Year Annual Research Report
乳癌術後の末梢性浮腫に対するVEGF-C遺伝子導入リンパ管新生療法の基礎的研究
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15591365
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| Research Institution | NIHON UNIVERSITY |
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Principal Investigator |
天野 定雄 日本大学, 医学部, 講師 (80159459)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
青木 信彦 日本大学, 医学部, 講師 (70318393)
柏尾 光彦 日本大学, 医学部, 助手 (20343577)
榎本 克久 日本大学, 医学部, 助手 (60386026)
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| Keywords | VEGF-C / 末梢性浮腫 / リンパ管新生 / 遺伝子導入 / 乳癌術後 |
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| Research Abstract |
平成16年度は末梢性浮腫のモデル作成を行い、プラスミドDNAの注入実験を行った。末梢性浮腫モデルはKawashima Tらの方法に準じてラットの両側の下肢で作成した。当初一側の下肢に浮腫を作成したが、治療の効果を検討する場合、両側に作成して、一側を治療する方法を行った。両側均等に浮腫の発生したモデルの大腿部皮下にプラスミドDNAを注入した。Miyazaki Jに恵与された、ラットに用いた場合に高発現を示す遺伝子ベクターであるpCAGGSプロモーターを用いることにした。まず、予備実験として、発現の確認をするために、pCAGGSの単独注入群、pCAGGS-EGFPの単独注入群、pCAGGS-EGFPをin vivo electroporation(IVE)法を用いた群にわけて検討した。In vivoelectroporation法を用いた場合のみに、EGFPの高発現が認められた。
実験方法:pCAGGSにhuman VGEF-Cをクローニングし、作製したプラスミドDNAをモデルの浮腫を発生大腿部に遺伝子導入装置(CUY21EDIT)を用いて直接注入した。
評価法:(1)下肢の周囲径計測。(2)実体顕微鏡下in vivoリンパ管密度(足背の皮下に炭粉CH50を注入)、(3)組織学的リンパ管密度、リンパ管断面積。VEGFR3,LYEV-1の抗体で動物モデルから採取した皮下組織の免疫染色を行い、さらにFLT-4 antisense mRNAによるISHも併用した。
成績
(1)肉眼的に浮腫が改善した例はなかったが、下肢周囲径の比では、2/7に改善を認めた。(2)皮下リンパ管の実体顕微鏡観察。両側の比較では統計学的な有意差はなかった。(3)免疫組織学的に皮下の脈管(リンパ管)密度を計測。注入側でリンパ管密度の増加はなかったが、リンパ管の断面積率は増加していた。
考察と問題点
1VEGF-CのプラスミドDNAの注入は浮腫を改善する効果を期待できる。
2発現ベクターの効率の向上のため新しいベクターの作成を進めている。
3注入側の局所に注入したプラスミドが非注入側を含めた全身のリンパ管に影響を与えている可能性もあり、その検証を進めている。
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Research Products
(1 results)
