慢性関節リウマチの多サイトカイン遺伝子治療法の開発

2003 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 15591570
• Research Institution: Toyama Medical and Pharmaceutical University
• Principal Investigator: 杉山 英二 富山医科薬科大学, 医学部, 助教授 (70179167)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 村口 篤 富山医科薬科大学, 医学部, 教授 (20174287) ; 岸 裕幸 富山医科薬科大学, 医学部, 助教授 (60186210)
• Keywords: 間接リウマチ / 遺伝子治療 / インターロイキンー4 / インターロイキンー10 / アデノ随伴ウイルス

Research Abstract

(目的)関節リウマチ(リウマチ)は関節破壊を伴う慢性炎症性疾患である。リウマチ増殖滑膜から産生される炎症性サイトカイン(IL-1,TNF,IL-6)がその発症進展に重要な役割を果たしており,抗サイトカイン療法が欧米を中心に広く普及している。しかし、生物製剤は高価であり、治療を中止すると再燃するなど問題も多い。そこで、関節リウマチの遺伝子療法の可能性について検討するため、抗炎症性サイトカインであるIL-4,IL-10をアデノ随伴ウイルス(Adeno-associated virus : AAV)の発現ベクターに組み込み、リウマチ滑膜細胞に感染させ、抗炎症作用について検討した。
(方法)AAVベクターにIL-10とIL-4のcDNAを同時に挿入した発現ベクターを作成し、ヒト胎児腎由来293細胞(パッケージング細胞)にトランスフェクションしてrAAVベクター(AAv-IL-10/IL-4発現ベクター)を精製した。NIH3T3細胞及びリウマチ滑膜細胞にAAV-IL-10/IL-4発現ベクターを感染させ、感染効率をウエスタンブロットおよびELISA法により確認した。
(結果)感染滑膜細胞からIL-4,IL-10タンパク質が培養上清中に9-50ng/mlのレベルで分泌された。リウマチ滑膜細胞はlipopolysaccharide(LPS)の刺激によりIL-6およびprostaglandinE2(PGE2)の産生が著しく増強したが、AAV-IL-10/IL-4発現ベクターを感染させると、その増強作用は完全に抑制された。
(結語)我々の作成したAAV-IL-10/IL-4発現ベクターは効率よくリウマチ滑膜細胞に感染し、PGE2,IL-6の産生を抑制した。この結果はIL-4,IL-10による遺伝子療法がリウマチ関節局所の炎症の機転を抑制しうることを示唆している。

Research Products

• [Publications] 金 哲雄, 杉山英二, 岸裕幸他: "AAVベクターを用いたIL-4,IL-10の多サイトカイン遺伝子導入による関節リウマチの治療の試み"リウマチ. 43・2. 296 (2003)
• [Publications] Shinoda-K, Sugiyama-E, Taki-H, et al.: "Resting T cells negatively regulate osteoclast generation from peripheral blood monocytes"Bone. 33・4. 711-720 (2003)
• [Publications] Harada-S, Sugiyama-E, Takebe-S, et al.: "Cooperative induction of 15-lipoxygenase in rheumatoid synovial cells by IL-4 and proinflammatory cytokines"Clinical and Experimental Rheumatology. 21・6. 753-758 (2003)