CD44V8-10isoformが癌細胞の浸潤、転移能に与える影響について

2006 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 15591687
• Research Institution: Kobe University
• Principal Investigator: 原 勲 神戸大学, 医学研究科, 助教授 (10263378)
• Keywords: 膀胱癌 / CD44 / 接着因子

Research Abstract

ヒト癌細胞株の中からCD44v8-10高発現株をPCRならびにWestern blottingにより選出し、genomic DNAよりsignal sequenceに相当する部分をPCRによって増幅し、TA cloning法によりveetorに導入し、CD44v8-10発現ベクターを作成した。種々のヒト癌細胞株をスクリーニングし、CD44 standard formは発現するが、CD44 high molecular formの発現が測定限界以下である細胞株を検索した結果、膀胱癌細胞株であるUM-UC-3がほとんどCD44v8-10を発現しないことがわかった。UM-UC-3にlipofectamine法を用いCD44v8-10発現ベクターを遺伝子導入し、Western blottingによりスクリーニングを行いCD44v8-10を過剰発現するtransfectantを得た。
得られたtransfectantと母細胞であるUM-UC-3の間にヒアルロン酸に対する接着能と遊走能の変化があるかどうか検討した。ヒアルロン酸をコーティングした培養プレートを作成し、固相ヒアルロン酸に対する結合能をcell adhesion assayにより測定した。CD44v8-10を過剰発現するtransfectantは母細胞であるUM-UC-3に比べ接着能は有意に低下していた。In vitroでの増殖能に関しては母細胞とtransfectantの間に有意な差は認められなかったが、ヌードマウスの皮下および膀胱に母細胞とtransfectantもを接種し増殖能を検討したところtransfectantにおいて有意に腫瘍の増殖能は亢進していた。また膀胱に接種した際にはtransfectantの方がリンパ節へ高率に転移を認めた。