マトリックスを用いた機能的重層化細胞シートの作成と尿道再建への応用

2003 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 15591705
• Research Institution: Nagoya City University
• Principal Investigator: 丸山 哲史 名古屋市立大学, 大学院・医学研究科, 助手 (50305546)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 郡 健二郎 名古屋市立大学, 大学院・医学研究科, 講師 (30122047) ; 林 祐太郎 名古屋市立大学, 大学院・医学研究科, 助教授 (40238134)
• Keywords: マトリックス / 重層化シート / 尿路上皮細胞 / 平滑筋細胞 / SIS

Research Abstract

本年度はシート状の細胞培養をラットにて行った。
培養尿路上皮シートの作製:ラットの尿道を摘出し小片とし、抗生剤含有リン酸緩衝液につけ滅菌処理した。これをDispase含有DME培地で処理することにより上皮層と筋層とに分けた。上皮層をTripsinで処理、攪拌し上皮細胞を単離し、feeder細胞である3T3細胞を敷いたフラスコ底にこれを播種する。増殖因子を加え、37℃10%CO_2にて細胞培養し、重層化した上皮シートを作成した。平滑筋細胞もほぼ同様の手順で行った。この場合feeder細胞は不要であった(丸山・浅井・篠原)。細胞増殖能および細胞活性の検討:経時的に尿路上皮および平滑筋各々に対して、細胞数の算定および位相差顕微鏡での形態観察を行った。その増殖能、活性および形態学的特徴を評価し、重層化しシートを成す最適な培養期間および培養の条件等を検討した(浅井・篠原)。マトリックスの作製:手術用縫合糸と同様の吸収素材にて繊維を作製した(polyglycolicacid(PGA):poly-DL-lactide-co-glycolide(PLGA)50:50)。このマトリックス上に細胞培養を行った。更にコラーゲンが主成分のsmall intestinal submucosal (SIS) sheet状で細胞培養を施行した。現在、尿路上皮および平滑筋各々に対して、シート状に重層化するのに最適なマトリックスの条件(素材、線維の幅等)を検討中である(丸山・浅井)。SISの尿道再建への応用:ラット尿道再建(次年度予定)の予備実験を施行した。尿道粘膜に欠損部分を作成し、ここにSISを補填したところ、これを足場として尿路上皮が再生した。