内分泌撹乱物質複合暴露による精巣の遺伝子発現変化の解析

2003 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 15591748
• Research Institution: Okayama University
• Principal Investigator: 佐々木 順造 岡山大学, 大学院・医歯学総合研究科, 教授 (30093686)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 小阪 淳 岡山大学, 大学院・医歯学総合研究科, 助教授 (40243216) ; 山田 輝夫 岡山大学, 大学院・医歯学総合研究科, 助手 (00033225) ; 野村 貴子 岡山大学, 大学院・医歯学総合研究科, 助手 (20116437)
• Keywords: 内分泌撹乱物質 / フタル酸エステル / 複合暴露 / DNAアレイ / in situ ハイブリダイゼーション / 精巣 / ラット / 定量化

Research Abstract

内分泌撹乱物質は、それぞれの物質は低濃度ながら、非常に多くの物質が環境中に存在している。これらの物質の複合暴露の実験を企画した。プラスチックの可塑剤であるフタル酸エステルDi(2-ethylhexyl)phthalate(DEHP)を35日令のウィスター系ラットに単独で経口投与したラットでは、投与6-9時間後に精細管に変性した精母細胞、多核精子細胞が増加するのが観察され、同時にTUNEL染色陽性細胞が検出され、生殖細胞のアポトーシスが誘起されていることが示唆された。
DEHPを投与したラットの精巣のmRNAより^<32>P標識したcDNAを合成し、DNAアレイを用いて、その遺伝子パターンを解析しDEHP投与直後から24時間後までの変化を調べた結果、testis lipid-binding protein(TLBP)など、数種の遺伝子の発現が著明に減少していることが、判明したが、定量RT-PCRでは著明な減少は認められなかった。無処理精巣切片でのISH解析では、TLBP mRNAは分裂期前後に多量観察され、分裂との関連が示唆された。cDNAアレイの結果を十分解析するために、精巣切片でのISH解析による遺伝子の発現の定量化を、rRNAを用いて試みた。ISH発現シグナル強度をPhotoshopのポスタリゼーション機能により黒色5、濃灰色4、灰色4、淡灰色2、白色1と、5段階に評価し数個の精細管の平均値をとることにより数値化が可能となった。その結果、早期一次精母細胞5、一次精母細胞4、複糸期精母細胞3、精子細胞1-2と生殖細胞の発育による発現強度の差を表現することが出来た。cDNAアレイによる分析結果に引き続いての形態学的解析により、網羅的にマーカー分子の挙動を明らかにすることによって、複合暴露による精巣萎縮の分子機構を明らかにしていく予定である。

Research Products

• [Publications] Honda, Mayumi: "Differential, histochemical and immunohistochemical changes in rat hepatocytes after isoflurane or sevoflurane exposure"Acta Med Okayama. 57. 1-12 (2003)
• [Publications] Hanada, Hideki: "Cyclosporin A inhibits thyroid hormone-induced shortening of the tadpole tail through membrane permeability transition mechanism"Comp Biochem Physiol Part B. 136. 473-483 (2003)
• [Publications] Kimura, Touji: "Quantification of in situ hybridization signals in rat testes"J Histochem Cytochem. 52(in press). (2004)