アンチセンスMGMT遺伝子導入による転写制御および薬剤感受性に関する研究

2003 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 15592112
• Research Institution: Okayama University
• Principal Investigator: 浅海 淳一 岡山大学, 医学部・歯学部附属病院, 講師 (60184131)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 河井 紀子 岡山大学, 大学院・医歯学総合研究科, 助手 (60284072) ; 村上 純 岡山大学, 医学部・歯学部附属病院, 助手 (40362983) ; 井上 哲圭 岡山大学, 大学院・医歯学総合研究科, 助手 (20223258)
• Keywords: MGMT / アンチセンスオリゴ導入 / アルキル化剤 / 口腔癌

Research Abstract

15年度研究報告
1.MGMTアンチセンスオリゴの作製
biognostik社のantisens custom design serviseを利用し,以下のごとくMGMTに特異的なアンチセンスオリゴ設計、作製を行った。
(3'-ccaagtaccaagtcgcaaacggtgc-5')
2.MGMTアンチセンスオリゴ導入によるMGMT阻害作用の確認
MGMT高発現細胞株四株に対し,アンチセンスオリゴ導入し,32時間後に総タンパクを回収,western blottingによりMGMT発現抑制条件を検討した。
その結果,各細胞株において,MGMTタンパク発現が顕著に低下していた。
タンパク発現について経時的に観察した結果,アンチセンスオリゴ導入48時間後にタンパク発現は回復する傾向を示した。32時間後の発現は全ての株で低下していた。このmorpholino antisense oligonucleotideはタンパク質への翻訳を特異的に阻害するため,RNAへの影響は少ないことが明らかとされている。今回,われわれの実験においてもMGMT RNA発現量は変化なかった。
3.MGMT抑制による薬剤感受性への影響の検討
今後,アルキル化剤耐性細胞株における,MGMTアンチセンスオリゴ導入による、アルキル化剤感受性への影響をMTT assayによって検討する予定である。現在,MTT assayの条件設定(細胞数,MTT取り込み時間)について検討中である。

Research Products

• [Publications] Higuchi Y, Asaumi J et al.: "Effects of p53 gene therapy in radiotherapy or thermotherapy of human head and neck souamous cell carcinoma cell lines"Oncology Reports. 10(3). 671-677 (2003)
• [Publications] Higuchi Y, Asaumi J et al.: "Thermoradiotherapy combined with adenoviral p53 gene therapy in head and neck souamous cellcarcinoma cell lines"Oncology Reports. 10(2). 415-420 (2003)