新規合成レチノイドFenretinideによる神経芽腫のアポトーシスの機序の解明

2003 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 15659249
• Research Institution: Kyoto Prefectural University of Medicine
• Principal Investigator: 杉本 徹 京都府立医科大学, 医学研究科, 教授 (90117888)
• Keywords: 神経芽腫 / レチノイド / Fenretinide / アポトーシス / 細胞シグナル伝達 / 細胞内活性酸素種

Research Abstract

【目的】Fenretinide(FR)は、神経芽腫(NB)細胞にアポトーシスを誘導し、臨床応用が期待されている新規合成レチノイドであるが、その作用機序はまだ完全に解明されていない。最近、ストレス応答性シグナル伝達路であるJNK,p38 MAPKシグナル路の持続的活性化とアポトーシスとの関連が注目されている。そこで、NB細胞株において、FRによるストレスシグナルの活性化について検討した。
【方法】当施設で樹立されたヒトNB細胞株のうち、FR感受性株としてKP-N-TKを、耐性株として、KP-N-TKをFR存在下で培養して樹立したKP-N-TK(FR-R)株とKP-N-SIFAを用いた。これらを10μMのFR存在下で培養した際のアポトーシスをTUNEL法とWestern blot法(WB)によるcaspase活性化で評価した。細胞内活性酸素種(ROS)の経時的変化を、蛍光色素であるCM-H2DCFDAを負荷したフローサイトメトリーで検討した。WBにて、JNK,p38 MAPKの燐酸化を検討した。
【結果】FRはKP-N-TK細胞において、ROS依存性にJNK,p38 MAPKを持続的に活性化し、アポトーシスを誘導した。一方、KP-N-TK(FR-R)とKP-N-SIFAにおいては、FRによる細胞内ROS誘導とJNK,p38 MAPKの持続的活性化が生じていなかった。
【考案・結論】FR感受性NB細胞株では、FRによるROS依存性のJNK,p38 MAPK持続的活性化が、アポトーシスと関連していることが示唆された。一方、FR耐性NB細胞株では、FR存在下でもこのシグナル伝達が生じておらず、このことがFR耐性と関連していると考えられた。

Research Products

• [Publications] S.Osone, T.Sugimoto et al.: "Fenretinide induces sustained-activation of JNK/p38 and apoptos's(in ROS-dependent manner) in neuroblastome cells"Int J Cancer. accepted. (2004)
• [Publications] Y.Kuwahara, T.Sugimoto et al.: "Antitumer activity of Gefitinib in malignant rhabdoid tumor cells"Clin Cancer Res. revised. (2004)
• [Publications] T.Goto, T.Sugimoto et al.: "Prediction of NYC amplification in neuroblastoma using serum DNA and real-time quantitative"Clin Cancer Res. revised. (2004)
• [Publications] F.Saito-Ohara, T.Sugimoto et al.: "PPMD1D is a potential target for 17q gain in neuroblastoma"Cancer Res. 63. 1876-1883 (2003)
• [Publications] A.Misawa, T.sugimoto: "Rapamycin inhibits proliferation of human neuroblastoma cells without suppression of NYCN"Int J Cancer. 104. 233-237 (2003)
• [Publications] 杉本 徹(分担): "小児疾患診療のための病態生理、神経芽腫"東京医学社. 1234-1240 (2003)