加齢に伴う卵胞の形質転換に関わる卵胞内因子の遺伝子学的検索

2004 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 15659389
• Research Institution: Hirosaki University
• Principal Investigator: 水沼 英樹 弘前大学, 医学部, 教授 (10125875)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 藤井 俊策 弘前大学, 医学部, 助教授 (10241481) ; 福井 敦史 弘前大学, 医学部附属病院, 助手 (00321969) ; 尾崎 浩士 弘前大学, 医学部附属病院, 助教授 (80260404)
• Keywords: in vitro follicle culture / Activin / DNAマイクロアレイ / GH

Research Abstract

我々はin vitro卵胞培養法を確立し、卵胞の形態学的変化と機能的分化を観察して来た。この一連の中で幼弱マウスより得られた前胞状期卵胞と成熟マウスより得られた卵胞ではFSHやactivinに対する反応性が異なること、また、同じ成長因子で刺激してもactivinと成長ホルモン(GH)では反応の異なることを明らかにした。そこで、加齢に伴う卵胞の形質転換を明らかにする目的で、本実験系を用いて発現する遺伝子の検索を行った。予備的実験では成熟したマウスからDNA抽出に十分な卵胞の採取は困難であることが判明したため、卵胞の採取が容易である11日齢BDF1マウスを用い、機械的に前胞状卵胞を採取しコントロール、Activin添加、GH添加の条件で4日間in vitroで培養した。Activin添加卵胞、GH添加卵胞のいずれもコントロール群に比べ有意に卵胞径の増大を認め、またエストライオールの分泌増加を示した。培養した卵胞は凍結し培養はDNAマイクロアレイ検索に十分な卵胞数が得られるまで繰り返した。必要卵胞数の得られた時点で、DNAの抽出を行い、20281種類の遺伝子につきDNAマイクロアレイ法を用いてmRNAの発現の違いを調べた。その結果、コントロールと比較しActivin群では50の遺伝子が強発現し、68の遺伝子が抑制された。GH群では29の遺伝子が強発現し44の遺伝子が抑制された。Activin群はGH群に比較して56の遺伝子が強発現し、逆にGH群では29の遺伝子が強発現していた。特にActivin群ではTNF-α、VEGF等のアポトーシス、血管新生関連遺伝子が発現していた。