免疫グロブリン領域によるB細胞性リンパ腫検索法の評価:特にPCR法陰性例の検討

2003 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 15790182
• Research Institution: Okayama University
• Principal Investigator: 大原 信哉 岡山大学, 大学院・医歯学総合研究科, 講師 (90325100)
• Keywords: 悪性リンパ腫 / 補助診断 / 免疫グロブリン重鎖領域 / PCR / 濾胞性リンパ腫 / (14;18)転座

Research Abstract

本研究では免疫グロブリン重鎖領域に重点をおき,B細胞性悪性リンパ腫と組織学的に確定された症例での,免疫グロブリン領域によるサザン法,PCR法による陽性率とその組み合わせ,主要組織型(濾胞性やび漫性大細胞型など)での陽性率,転座に関連したPCR法の有用性を検討する。
1.症例の選択 本学病理・病態学教室の悪性リンパ腫シリーズより,追加切片や抽出DNA利用可能な症例を選び,WHO分類による組織型,サザンブロット法による免疫グロブリン(JH領域)遺伝子検索結果を確認した。本年度はリンパ節病変についてPCR法を用いた検討を開始し,び漫性大細胞型B細胞性リンパ腫15例,濾胞性リンパ腫10例,及び対照として反応性リンパ節炎5例を中心に解析した。一般に利用されている免疫グロブリン重鎖領域のPCR法や,転座型遺伝子異常において代表的な(14;18)転座(bc12-IgH)について試行を行い,陽性率が高いと思われる条件を選択した。
2.PCRによる(14;18)転座の検討では,未固定材料抽出DNAを用いたlong PCR法により,濾胞性リンパ腫において高率に(14;18)転座が証明可能で,MBRとEμに対して設定されたプライマーペアによる陽性率が高かった。パラフィン材料でのPCRとの不一致例について検討中である。
3.免疫グロブリン遺伝子領域のPCR法によるmonoclonalityの検討について,重鎖のFr2a-LJH,Fr2a-VLJHによる2ステップPCRが比較的安定していた。これで陰性となった症例について,他のプライマーペアによるmonoclonality証明の可否について,またこの内サザンブロット陽性例については,その制限酵素処理後のDNAを用い,inverse PCR法によるIgH領域の増幅が可能か検討中である。