2004 Fiscal Year Annual Research Report
癌転移抑制因子テトラスパニンCD9,CD82による口腔癌転移抑制療法の開発
| Project/Area Number |
15791075
|
|---|
| Research Institution | Kyushu University |
|---|
Principal Investigator |
杉浦 剛 九州大学, 大学病院, 助手 (40322292)
|
|---|
| Keywords | CD82 / KAI-1 / integrin / EGF受容体 / HGF受容体 |
|---|
| Research Abstract |
【目的】CD82/KAI-1は癌転移抑制因子として同定され、種々の悪性腫瘍において本因子の高発現が良好な予後と相関することが報告されている。本因子はtetraspanin superfamilyに属する4回膜貫通型蛋白で、integrinとのcomplexまたは他の細胞膜蛋白を介して癌細胞の機能を制御していると考えられているが、そのメカニズムについては明らかにされていない。そこで培養癌細胞株にCD82を強制発現させ、CD82/KAI-1との相関をEGF、HGF等の増殖因子受容体を中心に検索した。
【方法と結果】まず、CD82遺伝子を癌細胞に導入しstable cell lineとして樹立した。このCD82強制発現細胞の細胞遊走をtime lapse videoにて観察した。その結果、EGF、HGFによる細胞遊走が対照細胞と比較して約90%抑制された。また、lamellipodiaの形成が対照細胞に対して明らかに抑制されていた。
CD82導入癌細胞株のcell lysateを抗CD82抗体にて免疫沈降すると、EGF受容体とHGF受容体が複合体として共沈された。また、抗α3 integrin抗体による免疫沈降ではEGF受容体分子は共沈されずCD82のみが共沈された。このことよりtetraspanin-integrin complexとは別の複合体を形成していると考えられた。
次に、EGFまたはHGF添加時の各受容体のチロシンリン酸化の経時的変化をwestern blotにて検討したところ、EGFR及びc-Metのリガンド結合によるリン酸化はほとんど変化しなかった。一方でsmall G蛋白の活性化をpull down assayにて検討するとリガンド刺激によるrhoA,Rac,cdc42の活性化が著明に変化しており、テトラスパニンが受容体シグナルの下流で低分子量G蛋白質を制御している可能性が示唆された。
|
Research Products
(3 results)
