2015 Fiscal Year Annual Research Report
臓器移植後の免疫抑制剤腎障害の発生機序の解明と新規保護物質の開発に関する研究
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15F15756
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| Research Institution | National Center for Child Health and Development |
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Principal Investigator |
梨井 康 国立研究開発法人国立成育医療研究センター, 移植免疫研究室, 室長 (60321890)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
LIU CHI 国立研究開発法人国立成育医療研究センター, 移植免疫研究室, 外国人特別研究員
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| Project Period (FY) |
2015-11-09 – 2018-03-31
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| Keywords | 免疫抑制剤 / 腎障害 / 腎移植 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
期間中主に「シクロスポリン投与による腎毒性モデルの作製」というテーマに絞って研究を行った。減塩餌を与えたC57BL/6マウスに、一カ月間30mg/kg/dayでシクロスポリンの皮下注射を行った。一カ月後、マウスの腎臓、血清等サンプルを採取し、組織はmRNA、miRNA、qRT-PCR及びマイクロアレイによる網羅的発現解析に供した。また、病理組織学的変化を免疫組織染色等を用いて検討した。血清はBUN、Cr等の生化学の検査、およびサイトカイン測定に供した。
血清を用いた生化学的検討により、腎障害の指標であるBUNおよびCrの増加が明らかになった。採取した組織に対してHE染色、マッソントリクローム染色、PAS染色を用いて病理学的な検討を行った。シクロスポリン投与群では、非投与群に比して著明な細胞浸潤、繊維化、再生尿細管基底膜の肥厚、糸球体メサンギウム基質の増生、ポーマン嚢基底膜の肥厚が認められた。さらに、免疫組織学的検討により、マクロファージの浸潤、α-SMAの発現増強が明らかになった。
組織タンパクのウエスタンブロットによる解析の結果、繊維化に関与する事が知られているTGF-βおよびコラーゲン1の発現増加が、明らかになった。さらに、アポトーシスに関与するCaspase3の発現の増加、また抗アポトーシスタンパクであるBcl2の発現低下が明らかになった。この結果は、TUNEL染色による病理学的検討におけるTUNEL陽性細胞（アポトーシスに陥った細胞）の増加の結果とも一致するものであった。また、qRT-PCRによる遺伝子発現解析の結果、炎症性サイトカインであるIL-6、TNF-α、iNOSのmRNAの発現増加が明らかになった。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
本年度において、減塩餌を与えたC57BL/6マウスに、一カ月間30mg/kg/dayでシクロスポリンの皮下注射を行った。一カ月後、マウスの腎臓、血清等サンプルの採取を行った。採取した組織はmRNA、miRNA、qRT-PCR及びマイクロアレイによる網羅的発現解析に供した。また、病理組織学的変化を免疫組織染色等を用いて検討した。計画していた「シクロスポリン投与による腎毒性モデルの作製」実験を完了した。
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| Strategy for Future Research Activity |
来年度は、シクロスポリン腎毒性マウスに対して、ALAの経口投与による効果を検証する。ALA投与による腎毒性に起因する死亡率の改善効果、腎臓の線維化抑制効果、腎臓細胞に対するアポートシスおよび酸化ストレスの抑制効果を検討していく予定です。また、ALAによる腎毒性抑制の機序を検討するため、ALAにより増加するHO-1の分子作用機構をマイクロアレイによる網羅的な遺伝子発現解析および、定量RT-PCRを用いて検討する予定である。
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Research Products
(1 results)
