2016 Fiscal Year Annual Research Report
母体、胎児免疫相関から見た妊娠維持機構ならびにその破綻
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15H04980
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| Research Institution | University of Toyama |
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Principal Investigator |
齋藤 滋 富山大学, 大学院医学薬学研究部(医学), 教授 (30175351)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
村口 篤 富山大学, 大学院医学薬学研究部(医学), 教授 (20174287)
二階堂 敏雄 富山大学, 事務局, 理事・副学長 (50180568)
瀧澤 俊広 日本医科大学, 大学院医学研究科, 大学院教授 (90271220)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2019-03-31
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| Keywords | 産科学 / 胎児医学 / 免疫学 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
1.父親抗原特異的Treg（PA-specific Treg）細胞の同定
不育症例60例より、初診時、妊娠7週、妊娠10週、28週、36週に末梢血、分娩時には末梢血と脱落膜よりリンパ球を分離し、20例の流産例も同様にした。Treg細胞をsingle cell sortingし、TCRα、TCRβ、Foxp3のmRNA発現をRT-PCR法で増幅した。その結果、正常妊娠では妊娠7週以降では脱落膜でTCRαのクロナリティーの集積が認められ、分娩時では20～30%のTreg細胞にクロナリティ―が認められた。流産例では脱落膜でのTCRαのクロナリティ―は正常妊娠に比し低率であった。一方、末梢血ではTregのTCRクロナリティーはいづれの場合でも認めなかった。
2. クローナルに増加した脱落膜Effector TregのTCRと、抗原特異性の検証
クローナルに増加した脱落膜Effector TregのTCR α鎖とβ鎖のペアの発現ベクターを作成した（3症例分6種類）。 脱落膜由来TCR発現ベクターをパッケージング細胞（Phoenix A）に導入し、レトロウイルスを作成した。レトロウイルスを母体PBMCに感染させTCRを発現させた。TCR遺伝子導入効率は約30%であった。 脱落膜由来TCR導入PBMCをresponderとし、臍帯血と自身のリンパ球をstimulatorとしてリンパ球混合培養試験を行った。 3.胎盤から産生されるmicro RNAが母体リンパ球に存在することの証明
母体末梢血NK細胞のmiRNA-mRNAの網羅的発現解析により母体NK細胞には胎盤由来miRNAであるC19MC miRNAが存在し、妊娠週数とともに増加した。in vitroモデルで絨毛癌細胞BeWo細胞由来のC19MC miRNAがエクソソームを介して、T細胞株であるJurkat細胞に取り込まれ、PRKG1の発現を抑制することを示した。すなわち母体免疫細胞が胎盤由来のエクソソームを介して胎盤由来miRNAを取り込み、内在遺伝子の発現を修飾していることを初めて明らかにした。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
・CD4+CD25+CD127lo/-細胞として制御性T細胞を単一細胞で抽出し、mRNA発現を単一細胞毎に検出するシステムを構築した。90％の確率で単一細胞に純化したCD4+CD25+CD127lo/-から制御性T細胞の転写遺伝子であるFoxp3 mRNA mRNAが検出され、手技が確立していることを確認した。
・すでに流産例10例、正常妊娠例10例の解析は終了しており、増幅したT細胞受容体（TCR）を母体末梢血リンパ球にレトロウイルスを用いて30％の高率で導入する系を確立した。その結果、正常妊娠ではTreg細胞のTCR発現に集積があったが、流産例ではなかった。
・現在、これらのTCR発現細胞と臍帯血との混合リンパ球培養試験（MLR）を3例に施行した。これら集積しているTCRの一部が臍帯血上の抗原を認識していた。
・胎盤から産生されるmiRNAを網羅的解析し、これら胎盤由来miRNAが母体末梢血のNK細胞に取り込まれており、PRKG1発現を抑制する事を見出した。
・羊膜細胞は単球から産生されるTNFα、IL-6産生を有意に抑制し抗炎症作用がある事を見出した。
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| Strategy for Future Research Activity |
1)【父親抗原特異的Treg細胞の同定】正常例、流産例をあと10例追加し、さらに早産例、妊娠高血圧症候群について、特定のTCR収束が観察されるかを検討する。現在すでに症例を集積中である。
2)【クローナルに増加した脱落膜effector Treg細胞のTCRと抗原特異性の検証】脱落膜中Tregで増加したTCRを、TCRを欠損するT細胞株のJurkatに導入し、臍帯血と第3者との混合リンパ球反応（MLR）を施行し、増加したTCRが胎児抗原を認識しているかを検討する。
3)【胎盤から産生されるmicroRNAが母体リンパ球に早産する事の証明】流産で胎児染色体正常5例、胎児染色体異常5例より脱落膜中NK細胞を純化して、microRNAを網羅的に解析して胎盤由来miRNA発現に差がないかを検討する。現在、解析中である。またこれらmiRNAの遺伝子調節している遺伝子をin silicoで同定し、mRANの網羅的解析で胎盤由来miRNAの関連を証明する。
4)【羊膜細胞における免疫抑制能に関する検討】臨床的にUreaplasmaと一般細菌との混合感染の際、羊水中のIL-8 値が極めて高値となる事を見出した。そこで羊膜間質細胞に、これら菌体成分を添加し、免疫を抑制するIL-10 、HLA-G、IDO発現につき検討する。
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Research Products
(63 results)
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[Journal Article] Fabrication of 3D-culture platform with sandwich architecture for preserving liver-specific functions of hepatocytes using 3D bioprinter.2017
Author(s)
Arai K, Yoshida T, Okabe M, Goto M, Mir TA, Soko C, Tsukamoto Y, Akaike T, Nikaido T, Zhou K, Nakamura M
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Journal Title
J Biomed Master Res A.
Volume: 105
Pages: 1583-1592
DOI
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[Journal Article] Antibiotic therapy increases the risk of preterm birth in preterm labor without intra-amniotic microbes, but may prolong the gestation period in preterm labor with microbes, evaluated by rapid and high sensitive PCR system.2016
Author(s)
Yoneda S, Shiozaki A, Yoneda N, Ito M, Shima T, Fukuda K, Ueno T, Niimi H, Kitajima I, Kigawa M, Saito S.
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Journal Title
Am J Reprod Immunol.
Volume: 75
Pages: 440-450
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Polymicrobial Amniotic Fluid Infection with Mycoplasma/Ureaplasma and Other Bacteria Induces Severe Intra-Amniotic Inflammation Associated with Poor Perinatal Prognosis in Preterm Labor.2016
Author(s)
Yoneda N, Yoneda S, Niimi H, Ueno T, Hayashi S, Ito M, Shiozaki A, Urushiyama D, Hata K, Suda W, Hattori M, Kigawa M, Kitajima I, Saito S.
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Journal Title
Am J Reprod Immunol.
Volume: 75
Pages: 112-125
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Impairment of the accumulation of decidual T cells, NK cells, and monocytes, and the poor vascular remodeling of spiral arteries, were observed in oocyte donation cases, regardless of the presence or absence of preeclampsia.2016
Author(s)
Nakabayashi Y, Nakashima A, Yoshino O, Shima T, Shiozaki A, Adachi T, Nakabayashi M, Okai T, Kushima M, Saito S.
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Journal Title
J Reprod Immunol.
Volume: 114
Pages: 65-74
DOI
Peer Reviewed
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[Presentation] Cis-interaction of TCRs and antigen/MHC class I complexes on CD8+ T cells causes their activation.2016
Author(s)
Kishi H, Jin A, Hamana H, Shitaoka K, Tajiri K, Kobayashi E, Kusano S, Yokoyama S, Ozawa T, Nagai T, Obata T, Hatakeyama S, Horii M, Hu Y, Zhang F, Muraguchi A.
Organizer
2016 International Congress of Immunology
Place of Presentation
Melbourne
Year and Date
2016-08-21 – 2016-08-26
Int'l Joint Research
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[Book] 事例から学ぶ～外科材料を利便化する原料の開発と作製／加工／評価: 14章 生体機能材料としての羊膜と被覆材への応用展望.2016
Author(s)
岡部素典, 吉田淑子, 米田徳子, 富田隆浩, 鈴木拓馬, 脇 博樹, 古市恵津子, 野村義宏, 宇治義則, 加藤 潔, 將積日出夫, 齋藤 滋, 二階堂敏雄.
Total Pages
93-103
Publisher
技術情報協会
