2018 Fiscal Year Annual Research Report
Analysis of mammalian germ cell-specific GPI-anchored proteins using genetically modified animals
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15H05573
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| Research Institution | Osaka University |
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Principal Investigator |
藤原 祥高 大阪大学, 微生物病研究所, 招へい准教授 (70578848)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2019-03-31
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| Keywords | 哺乳類生殖細胞 / GPIアンカータンパク質 / 遺伝子組換えマウス / CRISPR/Cas9 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
計画最終の今年度は、本課題の主プロジェクトの精子GPIアンカータンパク質LYPD4の機能を解析し、共通の表現型を持つ遺伝子（タンパク質）との関連を調べ、CRISPR/Cas9システムを用いたノックイン（KI）マウスを作製し検討を行った。その結果、前年度に論文発表（JCS. 2018）した精子膜タンパク質CMTM2A/BのKOマウスを用いてLYPD4との関連を調べたところ、LYPD4の発現に特に変化が見られなかったことから、LYPD4が既知の必須因子群とは別経路を介して精子受精能を制御している可能性を示唆する結果が得られた。また、これまで最も重要視されてきた精子膜タンパク質ADAM3（Exp Anim. 2018）との関連についても解析を行ったが、こちらもLypd4-KOマウスにおけるADAM3発現、及びAdam3-KOマウスにおけるLYPD4発現にも大きな影響が見られなかった。以上のことから、LYPD4が未知の経路を介して精子受精能を制御する新規タンパク質であることが明らかになった。これらの分子メカニズムを解明するために、LYPD4タンパク質のN末端側にFLAGタグを挿入したKIマウスの作製を試みた。その結果、作製には成功したが、残念ながらFLAG抗体を用いたWB及びIP-WB解析では目的タンパク質を検出することができなかった。現在、これまでの解析結果をまとめてLYPD4に関する論文として鋭意作成しており、準備ができ次第投稿する予定である。
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| Research Progress Status |
平成30年度が最終年度であるため、記入しない。
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| Strategy for Future Research Activity |
平成30年度が最終年度であるため、記入しない。
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[Journal Article] mDia1/3 generate cortical F-actin meshwork in Sertoli cells that is continuous with contractile F-actin bundles and indispensable for spermatogenesis and male fertility.2018
Author(s)
Sakamoto S, Thumkeo D, Ohta H, Zhang Z, Huang S, Kanchanawong P, Fuu T, Watanabe S, Shimada K, Fujihara Y, Yoshida S, Ikawa M, Watanabe N, Saitou M, Narumiya S.
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Journal Title
Plos Biology
Volume: 16
Pages: e2004874
DOI
Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
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[Journal Article] Activation of Myofibroblast TRPA1 by Steroids and Pirfenidone Ameliorates Fibrosis in Experimental Crohn's Disease.2018
Author(s)
Kurahara LH, Hiraishi K, Hu Y, Koga K, Onitsuka M, Doi M, Aoyagi K, Takedatsu H, Kojima D, Fujihara Y, Jian Y, Inoue R.
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Journal Title
Cellular and molecular gastroenterology and hepatology
Volume: 5
Pages: 299-318
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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