2015 Fiscal Year Annual Research Report
褐色脂肪細胞特異的な転写制御・エピゲノム制御におけるＮＦＩＡの役割に関する研究
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15J02835
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| Research Institution | The University of Tokyo |
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Principal Investigator |
平池 勇雄 東京大学, 大学院医学系研究科, 特別研究員(DC2)
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2015-04-24 – 2017-03-31
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| Keywords | 褐色脂肪細胞 / エピゲノム |
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| Outline of Annual Research Achievements |
我々はこれまでにマウス褐色脂肪組織、皮下白色脂肪組織、内臓白色脂肪組織に対してFAIRE-seq (Formaldehyde-Assisted Isolation of Regulatory Elements coupled with high-throughput sequencing)を施行し、ゲノム上のオープンクロマチン領域を網羅的に同定してきた。褐色脂肪特異的なオープンクロマチン領域のモチーフ解析から、転写因子NFIAは褐色脂肪分化の新規制御因子である可能性が考えられた。実際に、Gain of function/Loss of function双方の実験において、褐色脂肪分化におけるNFIAの役割が確かめられた。
今年度は3xFLAGタグを付加したNFIAのコンストラクトを作成し、C2C12筋芽細胞へ導入し褐色脂肪細胞へ分化させたサンプルでNFIAの結合部位を網羅的に同定すべく、ChIP-seq (Chromatin immunoprecipitation coupled with high-throughput sequencing)を施行した。シークエンスデータのマウスゲノム(mm9)へのマップ率は分化前が79.2%、分化後が77.9%と良好であった。MACS (Model-based Analysis of ChIP-Seq)法を用いたピークコールにより、分化前後それぞれのサンプルで31992個、32374個の結合部位を同定した。今後は結合部位のモチーフ解析やGO解析を含むゲノムワイド解析を進めていく予定である。
またNFIAが褐色脂肪分化作用を発揮するうえで必須の結合パートナーをunbiasedに同定すべく、質量分析法を駆使した解析に向けた検討を開始した。NFIA複合体の構成蛋白質をSDS-PAGE法で分離し銀染色法で可視化したところ、野生型NFIA複合体はコントロールや変異型NFIA複合体には含まれない特異的な構成蛋白質を有することが判明した。質量分析法へ向けた条件検討を進めている。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
ChIP-seqをはじめとする次世代シークエンサーを駆使した実験が予定通り進んでおり、ゲノムワイド解析も順調に進展している。また質量分析法を用いた解析についても予備検討が進んでいる。
引き続き、研究の完成に向けて尽力する計画である。
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| Strategy for Future Research Activity |
研究は順調に進捗しており、共同研究者とも引き続き連携して研究の完成を目指していく。
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Research Products
(2 results)
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[Presentation] NFIA Controls the Brown Fat Gene Program by Co-Localizing with PPARgamma at Cell Type-Specific Enhancers2016
Author(s)
Yuta Hiraike, Hironori Waki, Jing Yu, Kana Miyake, Masahiro Nakamura, Ken Suzuki, Ryo Nakaki, Hirofumi Kobayashi, Takahito Wada, Wei Sun, Tomohisa Aoyama, Yusuke Hirota, Gaku Nagano, Haruya Ohno, Kenji Oki, Masayasu Yoneda, Syuichi Tsutsumi, Hiroyuki Aburatani, Toshimasa Yamauchi and Takashi Kadowaki
Organizer
Keystone Symposia Conference: Metabolism, Transcription and Disease
Place of Presentation
アメリカ合衆国ユタ州スノーバード
Year and Date
2016-01-10 – 2016-01-14
Int'l Joint Research
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