2015 Fiscal Year Annual Research Report
Ｇ１期のダイナミックな変化を介した神経前駆細胞の細胞周期停止メカニズム
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15J06259
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| Research Institution | Waseda University |
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Principal Investigator |
宮下 聡 早稲田大学, 理工学研究科, 特別研究員(DC1)
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| Project Period (FY) |
2015-04-24 – 2018-03-31
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| Keywords | 小脳顆粒細胞 / 発生 / 細胞周期 / Prox1 / CyclinD1 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本年度は(1)胞周期の長さと細胞周期の停止の関連やProx1が細胞周期の長さに与える影響と(2)AT+GCPsとND+GCPsを区別することが期待される遺伝子改変マウスの解析を行った。
(1)チミジンのヌクレオシド類似体であるEdUを用いたcumulating label法で生体内での細胞周期の長さを調べた。その結果、AT+GCPsよりもND+GCPsの方が 2倍以上G1期が長いことが示された。先行研究から、この結果はND+GCPsの方がより分化に近い状態の前駆細胞であるということが示唆される。次に、Prox1によるG1期の長さの変化を調べるために、エレクトロポレーション法でProx1を過剰発現させたのち、EdUを連続投与することで、コントロールとのG1期の変化を調べた。その結果、Prox1を過剰に発現させたAT+GCPsは、Controlと比較して有意にG1期が延長していることが示された。さらに、CyclinD1をProx1と共に過剰発現させることで、G1期の延長がキャンセルされることも同様の手法で示された。
(2)計画では、PCNAEGFP;NeuroDtdTomatoダブルKIマウスを用いて、AT+GCPsとND+GCPsを区別する予定であった。しかし、先行研究でAtoh1-enhancerにGFPを結合させたTgマウス(Atoh1-GFP)を用いて、GFPの強度で様々な細胞集団を分離することができることがわかったので、共同研究先からAtoh1-GFPを譲渡していただき、 Atoh1-GFPマウスの固定サンプルを観察したところ、AT+GCPsとND+GCPsを区別できることが示された。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
研究全体は順調に遂行しており、研究課題を達成する上で基礎となるいくつかの重要なデータを得ることができた。特に、Prox1によってG1期の長さが変化することを示せた点は、研究計画を遂行する上で非常に重要な成果である。
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| Strategy for Future Research Activity |
当初の研究計画を順調に遂行しているため、今後は特に、AT+GCPsとND+GCPsを区別し、それぞれに特異的に発現している遺伝子の解析に注力し研究を行う。まずは、Atoh1-GFPマウス由来の顆粒細胞をFACSを用いてGFPの輝度で正確にAT+GCPsとND+GCPsに区別する実験系の構築を目指す。
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[Journal Article] Origins of oligodendrocytes in the cerebellum, whose development is controlled by the transcription factor, Sox92016
Author(s)
Ryoya Hashimoto, Kei Hori, Tomoo Owa, Satoshi Miyashita, Kenichi Dewa, Norihisa Masuyama, Kazuhisa Sakai, Yoneko Hayase, Yusuke Seto, Yukiko U.Inoue, Takayoshi Inoue, Noritaka Ichinohe, Yoshiya Kawaguchi, Haruhiko Akiyama, Schuichi Koizumi, Mikio Hoshino
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Journal Title
Mechanisms of development
Volume: -
Pages: -
DOI
Peer Reviewed / Int'l Joint Research / Acknowledgement Compliant
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