2016 Fiscal Year Research-status Report
内因性nAChR活性化蛋白質SLURP-1のT細胞分化に及ぼす作用の薬学的研究
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15K07969
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| Research Institution | Kitasato University |
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Principal Investigator |
川島 紘一郎 北里大学, 薬学部, 客員教授 (70095008)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
藤井 健志 同志社女子大学, 薬学部, 教授 (80255380)
間下 雅士 同志社女子大学, 薬学部, 助教 (30738886)
堀口 和秀 福井大学, 学術研究院医学系部門, 准教授 (20377451)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | alpha7 nAChR / GTS-21 / SLURP-1 / Th分化 / Th1 / Th2 / Th17 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
alpha7 nAChRは，リンパ球，樹状細胞（DCs），およびマクロファージなどの免疫細胞にも発現している．alpha7 nAChRのT細胞分化誘導への関与が想定されている．SLURP-1は，alpha7 nAChR陽性アロステリック・リガンドである．我々は，ヒト扁桃濾胞周辺部に存在する成熟DCsにおけるSLURP-1発現を観察した．さらにSLURP-1は，ヒトT細胞系白血病細胞株MOLT-3と末梢血単核白血球において，①増殖の抑制，②細胞内ACh含量およびACh合成酵素遺伝子発現を増大させた．今年度はalpha7 nAChR作用薬GTS-21のT細胞分化誘導への関与をマウスで検討した．
BALB/c系卵白アルブミン（OVA）特異的MHCクラスⅡ拘束性TCR遺伝子導入トランスジェニックDO11.10マウスの脾細胞中に含まれるナィーブT細胞（Th0）を，OVAまたはOVA peptide（OVA-p）を添加して，抗原提示細胞（APCs）依存的に活性化させた．GTS-21存在下で脾細胞を5日間培養した後に，CD4+ T細胞のサイトカイン産生パターン(IFN-γ，IL-4，IL-17: Th1，Th2，Th17)を指標としてTh0分化に及ぼす作用を検討した．さらに，APCsのOVA取込みに及ぼす作用を検討して，GTS-21の作用メカニズムを調べた．
OVAによるAPCs依存性Th0活性化では，GTS-21はTh1，Th2およびTh17 への分化をすべて抑制した．APCsにおける抗原処理を要しないOVA-pによるTh0活性化では，GTS-21はすべての分化を促進させた．GTS-21は，APCsへのOVA取込みには影響を及ぼさなかった．alpha7 nAChR刺激は，APCsでは抗原処理過程を阻害してTh分化を抑制するが，Th0では分化誘導を促進した．
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
平成27年度の研究においてSLURP-1の種差の問題が浮上し，マウス脾細胞ではヒト型rSLURP-1は作用を発現しない可能性が明らかになった．そこで，平成28年度においては，DO11.10マウスの脾細胞中に含まれるTh0をOVAまたはOVA-pを用いて分化誘導して，alpha7 nAChR 部分的作用薬GTS-21のTh分化に及ぼす作用を観察した．その結果，①APCs上のalpha7 nAChR刺激は，APCの機能を抑制して抗原処理過程を阻害してTh分化の進行を阻害すること，②Th0上のalpha7 nAChR刺激は，Th分化を促進する可能性が明らかになった．将来的にはヒトTh0を使用してヒト型rSLURP-1を用いて研究を実施すれば，同様な結果が得られる可能性を明らかにすることができた．
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| Strategy for Future Research Activity |
免疫細胞に発現するalpha7 nAChRは，従来の神経細胞上に発現するalpha7 nAChRとは性質上に相違があることが報告されている．すなわち，従来のalpha7 nAChR拮抗薬methyllycaconitine（MNL）やalpha-bungarotoxinは，GTS-21の神経細胞上のalpha7 nAChRにおける作用は遮断するが，免疫細胞上のalpha7 nAChRにおける作用は遮断できないことが明らかになってきた．そこで，本年度の研究では，平成28年度に観察された作用が実際にalpha7 nAChRを介するものであるか否かを確認するために，alpha7 nAChRノックアウト（alpha7-KO）マウスとそのワイルドタイプ（WT）マウスの脾細胞を用いて比較実験を行うことにする．これにより，a7 nAChRのT細胞分化への関与が確認されるはずである．同様に，SLURP-1のTh分化への関与が類することができるであろう．
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| Causes of Carryover |
使用予定の抗体試薬の納入遅延のため．
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
新年度に納入予定．
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