下垂体腺腫における14q32インプリンティング領域の遺伝子発現制御機構

2015 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 15K09435
• Research Institution: The University of Tokushima
• Principal Investigator: 吉本 勝彦 徳島大学, 大学院医歯薬学研究部, 教授 (90201863)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 岩田 武男 徳島大学, 大学院医歯薬学研究部, 助教 (10350399) ; 水澤 典子 徳島大学, 大学院医歯薬学研究部, 助教 (80254746)
• Project Period (FY): 2015-04-01 – 2018-03-31
• Keywords: 腫瘍 / 下垂体 / miRNA / インプリンティング

Outline of Annual Research Achievements

下垂体の腫瘍化機構においてエピゲノム異常の関与が想定される。本研究においては、下垂体腺腫各タイブにおいて、特徴的発現パターンを示す14q32インプリンティング領域に位置するマイクロRNA (miRNA)クラスター および長鎖非コードRNA (lncRNA)、蛋白をコードする遺伝子のインプリンティング発現調節機構およびその破綻を解析することにより下垂体腺腫の発生・進展への関与を解明する。
マイクロアレイの再解析結果から、14q32に位置するmiR-770からmiR-370のクラスター、miR-379からmiR-656のクラスターでは、ナルセル, FSH/LH, ACTH腺腫で低いシグナルを示すが、GH腺腫では2倍程度の発現増加を認めた。他のインプリンティング領域（19q13.4、11p15.5、7q32.2、20q13.3）では正常下垂体組織で発現シグナルが弱いこと、各タイプの腺腫においてもシグナル変化を認めないから、14q32領域に特異的は変化であることを確認した。
同部位に位置し蛋白をコードし父方アレルが発現するDLK-1およびRTL-1は、GH腺腫で発現が高く、ナルセル, FSH/LH, ACTH腺腫で低発現を示すこと、長鎖非コードRNAで母方アレルが発現するMEG3、MEG8はナルセル, FSH/LH, ACTH腺腫で低発現を示すことをrRT-PCRで確認した。
MEG3-DMRにおけるbisulphite sequencingにおいて、正常下垂体組織ではメチル化を示すクローンは半数であった。本結果は正常下垂体において片親由来のDMR部位がメチル化されている可能性を示唆する。一方、FSH/LH腺腫3例では100％ちかいクローンがメチル化を受け、高メチル化状況であることを認めた。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

非機能性腺腫やACTH腺腫におけるmiRNAの発現低下は、14q32に位置するインプリンティング領域内のmiRNAクラスターに特異的に認められること、及び14q32のインプリンティング状況を調節するMEG3-DMRにおいて、解析した領域が高メチル化状態を示すことを確認したことより、順調に進展していると考える。

Strategy for Future Research Activity

メチル化状況の検討には、解析部位および腺腫の解析数を増やすためには、bisulphite sequencingでは多量の労力を要することがわかった。そこで、定量化も優れているpyrosequencingを用いて解析することとした。

Causes of Carryover

平成28年度実施予定のゲノムコピー数の解析の試薬が高額であることが見込まれるため

Expenditure Plan for Carryover Budget

平成28年度実施予定のゲノムコピー数の解析の試薬に充当する予定

Research Products

• [Presentation] 下垂体腺腫の分子病理学 (2016)
  • Author(s): 吉本勝彦
  • Organizer: 第61回成長ホルモン研究会
  • Place of Presentation: ホテルキャッスルプラザ（愛知県名古屋市中村区）
  • Year and Date: 2016-02-27 – 2016-02-28
  • Invited
• [Presentation] 下垂体腫瘍発生と原因遺伝子 (2015)
  • Author(s): 吉本勝彦
  • Organizer: 第25回 臨床内分泌代謝Update
  • Place of Presentation: 東京国際フォーラム（東京都千代田区）
  • Year and Date: 2015-11-27 – 2015-11-28
• [Presentation] シンポジウム「MEN1の基礎と臨床」：腫瘍発生分子機構のoverview (2015)
  • Author(s): 吉本勝彦
  • Organizer: 第88回日本内分泌学会学術総会
  • Place of Presentation: ホテルニューオオタニ東京（東京都千代田区）
  • Year and Date: 2015-04-23 – 2015-04-25
• [Presentation] シンポジウム「下垂体腺腫の診断と治療Update 2015」：下垂体腺腫の腫瘍化機構 (2015)
  • Author(s): 吉本勝彦
  • Organizer: 第88回日本内分泌学会学術総会
  • Place of Presentation: ホテルニューオオタニ東京（東京都千代田区）
  • Year and Date: 2015-04-23 – 2015-04-23