Novel chimeric antigen receptor modified T cells against IGF receptor for osteosarcoma

2017 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 15K09648
• Research Institution: Nagoya University
• Principal Investigator: 西尾 信博 名古屋大学, 医学部附属病院, 特任助教 (00586430)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 中沢 洋三 信州大学, 医学部, 助教 (60397312)
• Project Period (FY): 2015-04-01 – 2018-03-31
• Keywords: キメラ抗原受容体

Outline of Annual Research Achievements

１）本研究は、がんの新たな免疫療法として期待されているキメラ抗原受容体（CAR）遺伝子改変T細胞療法を、従来の治療に抵抗性の骨肉腫患者の新規治療法として開発するための基盤研究である。２）本研究では、キメラ抗原受容体遺伝子の導入方法としてウイルスベクターより安全性の高いとされている非ウイルスベクターであるpiggyBacトランスポゾン法を用いた。３）我々は、他のCARを発現するpiggyBacトランスポゾンベクターを遺伝子組換え技術を用いて改変し、抗X特異的キメラ抗原受容体(抗X.CAR)トランスポゾンベクターを作成した。４）このベクターを用いて、抗X.CAR-T細胞の作製、培養を行った。抗X.CARトランスポゾンベクターとpiggyBacトランスポザーゼ発現ベクターを末梢血単核球にエレクトロポレーションによって遺伝子導入し、その後インターロイキン７、インターロイキン１５を添加した培地で約２週間培養することにより、抗X.CAR-T細胞を作製できた。５）piggyBacトランスポゾンベクターを用いた遺伝子導入で、導入効率を上昇させる方法を開発した。６）３種類のヒト骨肉腫細胞株を用いてX1、X2の発現をフローサイトメトリーで確認し、抗X.CAR-T細胞、コントロールCAR-T細胞と共培養を行ったところ、抗X.CAR-T細胞は抗原特異的に強い細胞傷害性を発揮することを確認した。７）inverse PCRと次世代シークエンサーを用いて、CAR遺伝子のゲノムへの挿入部位を決定する方法を開発した。８）ヒト骨肉腫細胞株を免疫不全マウスの皮下に注射し、ヒト骨肉腫細胞マウスを作成した。そのマウスに抗X.CAR-T細胞またはコントロールCAR-T細胞を注射し、in vivoでの抗腫瘍効果を観察したが、本モデルでは抗X.CAR-T細胞のコントロールT細胞を上回る抗腫瘍効果は見られなかった。

Research Products

• [Journal Article] Enhanced Expression of Anti-CD19 Chimeric Antigen Receptor in piggyBac Transposon-Engineered T Cells (2018)
  • Author(s): Morita Daisuke、Nishio Nobuhiro、Saito Shoji、Tanaka Miyuki、Kawashima Nozomu、Okuno Yusuke、Suzuki Satoshi、Matsuda Kazuyuki、Maeda Yasuhiro、Wilson Matthew H.、Dotti Gianpietro、Rooney Cliona M.、Takahashi Yoshiyuki、Nakazawa Yozo
  • Journal Title: Molecular Therapy - Methods & Clinical Development Volume: 8 Pages: 131～140
  • DOI: https://doi.org/10.1016/j.omtm.2017.12.003
  • Peer Reviewed / Int'l Joint Research
• [Presentation] PiggyBac遺伝子改変CD19キメラ抗原受容体T細胞療法のFirst in Human試験にむけた基盤研究 (2017)
  • Author(s): 西尾信博、鈴木哲、奥野友介、中沢洋三、田中美幸、盛田大介、濱田太立、川島希、成田敦、村松秀城、濱麻人、小島勢二、高橋義行
  • Organizer: 第６回日本血液学会東海地方会
• [Presentation] PiggyBac Mediated T cells Expressing anti CD19 Chimeric Antigen Receptor for a Clinical Trial (2017)
  • Author(s): Nobuhiro Nishio, Yozo Nakazawa, Motoharu Hamada, Satoshi Suzuki, Miyuki Takana, Daisuke Morita, Nozomu Kawashima, Yusuke Okuno, Atsushi Narita, Asahito Hama, Hideki Muramatsu, Wilson H. Matthew, Cliona M. Rooney, Gianpietro Dotti, Seiji Kojima, Yoshiyuki Takahashi
  • Organizer: 第20回American Society of Gene and Cell Therapy
  • Int'l Joint Research
• [Presentation] PiggyBac Mediated T cells Expressing Anti-CD19 Chimeric Antigen Receptor for a Clinical Trial (2017)
  • Author(s): Nobuhiro Nishio, Yozo Nakazawa, Motoharu Hamada, Satoshi Suzuki, Miyuki Takana, Daisuke Morita, Nozomu Kawashima, Yusuke Okuno, Atsushi Narita, Asahito Hama, Hideki Muramatsu, Seiji Kojima, Yoshiyuki Takahashi
  • Organizer: 第8回日本血液学会国際シンポジウム
  • Int'l Joint Research
• [Presentation] Durable Remission After Salvage Chemotherapy with Combining Bortezomib and Vorinostat Followed by CD19 CAR-T Therapy in a Patient with MLL-rearranged ALL After Early Relapse Post Allogeneic Hematopoietic Stem Cell Transplantation (2017)
  • Author(s): Nobuhiro Nishio, Kai Wang, Shinsuke Kataoka, Kotaro Narita, Hironobu Kitazawa, et al.
  • Organizer: 第５９回米国血液学会
  • Int'l Joint Research