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2015 Fiscal Year Research-status Report

iPS細胞を用いた冠循環を構築する三次元心筋組織の創生

Research Project

Project/Area Number 15K15506
Research InstitutionOsaka University

Principal Investigator

宮川 繁  大阪大学, 医学(系)研究科(研究院), 特任准教授(常勤) (70544237)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 福嶌 五月  大阪大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (80596867)
Project Period (FY) 2015-04-01 – 2017-03-31
KeywordsiPS細胞 / 三次元組織化
Outline of Annual Research Achievements

ヒトiPS細胞から分化誘導した心筋細胞表面にフィルターLbL法(Nishiguchi A., Adv Mater., 2011)を用いて,およそ6 nmのフィブロネクチンとゼラチン薄膜をコートし,2.9×105個/㎝2を1層として積層化し,三次元心筋組織を作製した。plate上に三次元心筋組織を作製し、心筋細胞に対する薬理作用が明らかな薬剤を用いて薬剤応答の評価を行った。各薬剤添加後、細胞障害性・生存率をMicroplate reader、細胞内カルシウム動態をFDSS/µCELL、収縮(動き)特性をCell Motion Imaging Systemを用いて評価した。
作製した三次元心筋組織は、約50-100umの厚みをもち、HE染色により、また心筋構造タンパクおよび細胞外マトリックスタンパクの発現を認めた。顕微鏡観察において、組織体全体に同期拍動を認め、免疫組織染色によりConnexin43の発現も確認されたことから、電気的接合を有することが示唆され、心筋組織体として機能していることを確認した。
薬剤添加による収縮特性を解析した結果、KチャネルブロッカーE-4031添加培養において、拍動数、収縮・弛緩速度、および収縮弛緩変位距離の減少を示し、30nM以上で有意な差を認めた。一方、Isoproterenol添加において、1000nMでの拍動数の有意な増加を認め、収縮・弛緩速度、および収縮弛緩変位距離の増加傾向を示した。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

ヒトiPS細胞由来心筋細胞は、自律拍動することが最大の特徴であり、今年度は三次元組織化したiPS細胞由来心筋細胞の自律拍動を定量的に解析し、薬剤応答を評価することができた。

Strategy for Future Research Activity

今後は、スクリーニングシステムの信頼性を高めるための組織の安定的構成と維持を実現するための評価項目の確立と、細胞外マトリックスタンパクの最適化を行う。

Causes of Carryover

三次元組織化したiPS細胞由来心筋細胞の解析に関する消耗品を予定より押さえることが出来たため

Expenditure Plan for Carryover Budget

引き続き実験に必要な試薬および消耗品として使用する

  • Research Products

    (5 results)

All 2016 2015

All Presentation (5 results) (of which Int'l Joint Research: 2 results,  Invited: 2 results)

  • [Presentation] ヒトiPS細胞由来3次元心筋組織を用いた薬剤安全性スクリーニングシステムの検討2016

    • Author(s)
      武田真季、宮川繁、福嶌五月、齋藤充弘、増田茂夫、李鍾國、今西悠基子、伊東絵望子、原田明希摩、小田紀子、天野雄斗、松崎典弥、明石満、澤芳樹
    • Organizer
      第15回日本再生医療学会
    • Place of Presentation
      大阪国際会議場
    • Year and Date
      2016-03-17 – 2016-03-19
  • [Presentation] 再生医学を用いた重症心不全に対する挑戦2015

    • Author(s)
      宮川繁
    • Organizer
      第53回日本人工臓器学会
    • Place of Presentation
      東京ドームホテル
    • Year and Date
      2015-11-21 – 2015-11-21
    • Invited
  • [Presentation] Development of In Vitro Drug-Induced Cardiotoxicity Assay by Using Three-Dimensional Cardiac Tissues Derived from Human Induced Pluripotent Stem Cells2015

    • Author(s)
      Takeda M, Miyagawa S, Fukushima S, Ito E, Matsuura R, Harada A, Amano Y, Matsusaki M, Akashi M,
    • Organizer
      American Heart Association Scientific Sessions 2015
    • Place of Presentation
      Orlando, USA
    • Year and Date
      2015-11-07 – 2015-11-11
    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] iPS細胞を用いた新しい心不全治療法の開発2015

    • Author(s)
      宮川繁
    • Organizer
      第19回日本心不全学会
    • Place of Presentation
      大阪
    • Year and Date
      2015-10-19 – 2015-10-21
    • Invited
  • [Presentation] Development of Functional Tissue-engineered Artificial Cardiac Construct generated by Human Induced Pluripotent Stem Cells2015

    • Author(s)
      Iseok H, Miyagawa S, Fukushima S, Saito A, Ito E, Sawa Y
    • Organizer
      TERMIS
    • Place of Presentation
      Boston, USA
    • Year and Date
      2015-09-08 – 2015-09-11
    • Int'l Joint Research

URL: 

Published: 2017-01-06  

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