2005 Fiscal Year Annual Research Report
遺伝子欠損マウスを用いたゲノム情報維持の分子機構に基づく変異原性の評価系の開発
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16310043
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| Research Institution | Kyushu University |
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Principal Investigator |
續 輝久 九州大学, 大学院・医学研究院, 教授 (40155429)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
中津 可道 九州大学, 大学院・医学研究院, 助教授 (00207820)
早川 浩 九州大学, 大学院・医学研究院, 助手 (70150422)
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| Keywords | 遺伝子 / 核酸 / 環境 / ゲノム / 放射線 / 突然変異 / 酸化ストレス / 活性酸素 |
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| Research Abstract |
酸化的DNA損傷に対する生体防御機構を基盤に、高感度の変異原性評価系を確立することを目的として解析を進めている。
1.酸化ストレスとしてのX線の間接作用に注目して、6週齢の野生型並びにOgg1遺伝子欠損マウスにX線4Gyを全身照射し、2週間後に脾臓からDNAを抽出して突然変異を解析した。その結果、X線照射されたOgg1遺伝子欠損マウスでは、G:C→T:A型トランスバージョン変異が有意に上昇していた。
2.Mutyh遺伝子欠損マウスでの自然突然変異の解析で、G:C→T:A型トランスバージョン変異が有意に上昇していたことを踏まえ、酸化剤である臭素酸カリウムを飲水投与したマウスの小腸での突然変異解析を行った。その結果、対象群と比較して、酸化ストレスを誘発したMutyh遺伝子欠損マウスでG:C→T:A型変異の有意な増加を認めた。自然及び酸化ストレス誘発突然変異の解析の結果、Mutyhは内因性、外因性の酸化ストレスにより生じた8-oxoG等の酸化的DNA損傷に起因する変異を抑制していると考えられる。
3.酸化的RNA損傷に対する生体防御機構に関与していると考えられる大腸菌PNPのヒトホモログPNPT1のcDNAをGST融合タンパク質(GST-PNPT1)として大腸菌で発現・精製し、GST-PNPT1が大腸菌のPNPと同様にpolynucleotide phosphorylase活性を有し、酸化RNAに結合することを見出した。さらに特異的抗体とRNAiを用いてHeLa細胞内の蛋白質を同定し、免疫沈降法によりPNPT1をHeLa細胞から部分精製して酵素活性を確認した。PNPT1は細胞が酸化ストレス下で急激に減少すること、またこの減少は酸化ストレスに特異的であることを見出した。以上のことからPNPT1蛋白質は動物細胞内で酸化ストレスに反応し、損傷RNAの感知と除去に働いている可能性が示唆された。
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Research Products
(7 results)
