2004 Fiscal Year Annual Research Report
多糖・オリゴ核酸複合体を用いた抗原提示細胞への免疫刺激性CpG配列のデリバリー
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16350068
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Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
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| Research Institution | The University of Kitakyushu |
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Principal Investigator |
櫻井 和朗 北九州市立大学, 国際環境工学部, 教授 (70343431)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
穴田 貴久 科学技術振興機構, SORSTプロジェクト研究員 (30398466)
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| Keywords | CpGDNA / 抗原提示細胞 / デリバリーシステム / シゾフィラン / 3重螺旋複合体 / 多糖・核酸複合体 / エンドソーム / インターロイキン |
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| Research Abstract |
近年、ウイルスに特異的なDNAの配列であるメチル化されていないCpGDNAを免疫系の細胞である抗原提示細胞に取り込ませて、細胞性免疫の活性する方法が注目を浴びている。しかし、CpG DNAそのものは生体で分解されやすく、デリバリーシステムの開発が不可欠である。そこで、SPGと核酸の複合体をこのデリバリーに応用することを目的として研究を始めた。すでに明らかにされている様に、シゾフィラン(SPG)は水素結合と疎水的相互作用によって、DNAと2:1の3重螺旋複合体を形成する。この複合体は培地中のDNaseによるDNAの加水分解を大幅に抑制するとともに、アルブミン等の血漿タンパクとDNAの非特異的吸着を抑制する。あらかじめs-SPGに修飾された細胞表面結合部位によって、s-SPG/DNA複合体はエンドサイトーシスにより細胞内に取り込まれる。たとえば、コレステロールを修飾したSPGとCpG DNAの細胞への取りこみでは、LDL受容体を介して細胞に取り込まれ、エンドソームへ移行する。後期エンドソームのベシクル内のpHは5程度まで低下することが知られている。pHが酸性側になると核酸塩基のプロトン化によって複合体が解離し、TLR9に認識されて免疫を刺激する。
マウス由来のマクロファージにおけるIL12産生を比較したところ、細胞にCpG DNAを接触させた後24時間後のIL12の濃度をIL-12 ELISA Kit (ENDOGEN)にて定量した。NakedのCpG DNAを投与したときと比較して、4倍から5倍量のIL12が放出されていた。また、フルオロセインを修飾したSPGを細胞に接触させ、レーザー共焦点顕微鏡で観察したところ、R8とRGD修飾のSPGはマクロファージー内への取り込みが確認できた。
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