2004 Fiscal Year Annual Research Report
精子の形成と機能におけるカルシウム動員情報伝達系の役割
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16370064
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Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
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| Research Institution | Tokyo University of Pharmacy and Life Science |
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Principal Investigator |
深見 希代子 東京薬科大学, 生命科学部, 教授 (40181242)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
中村 由和 東京薬科大学, 生命科学部, 助手 (60366416)
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| Keywords | 受精 / ホスホリパーゼCδ4 / カルシウム / Glutamate receptor binding protein 1 |
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| Research Abstract |
本申請では、受精の種々のステップにおいて、どの様な酵素が、どの様にカルシウムの上昇を調節し、生理機能を制御しているのか、その分子メカニズムを解明することを目的とした。特に、カルシウム動員の第一ステップを制御し、進化的に種を越えて保存されているにもかかわらず、活性制御機構や生体内の役割が判明していないホスホリパーゼC(PLC)デルタタイプの生殖細胞の分化と受精における役割の解明を行った。
PLCデルタタイプの一つPLCδ4は、精子先体反応時に細胞内のカルシウム上昇のみならず、細胞外からのカルシウム流入も制御する可能性が示唆されたので、第一にどの様にPLCδ4がカルシウム流入を制御するのか、介在するタンパク質の同定を試みた。PLCbタイプがTransient receptor potential (Trp)と結合することが最近報告されたので、まずPLCδ4のC2ドメインをベイトとして精巣のライブラリーを用いて酵母two-hybrid法により結合タンパク質を検索した結果、Glutamate receptor binding Protein 1 (GRIP1)をPLCδ4結合タンパク質として見出した。この結合が生理的なものであるかを抗PLCδ4抗体を用いて免疫沈降法で検討した所、精巣の可溶性画分からGRIP1が共沈することが判明した。抗PLCδ1抗体を用いた場合にはGRIP1が共沈しないことから、PLCδ4とGRIP1の結合は特異的であることが明らかになった。また、PLCδ4、GRIP1のそれぞれの結合部位を決定し、PLCδ4C2ドメインのC端の4つのアミノ酸が、GRIP1の6番目または7番目のPDZドメインと結合することが判明した。更に精巣でのPLCδ4、GRIP1のそれぞれの局在を組織染色によって検討した所、PLCδ4は精粗細胞に強く局在し、精母細胞にも存在した。一方GRIP1は精母細胞に強い局在が観察され、両者は精母細胞で共局在することが明らかになった。以上のことから、PLCδ4とGRIP1が精巣において生理的に結合し、精子の分化に何らかの役割を担うことが示唆された。
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Research Products
(6 results)
