| Research Abstract |
ハロタンで麻酔したラットを開胸し,クレブス液約50mlを100mmHgの圧をかけながら左心室より潅流後,頚髄を摘出した.次に,ビブラトームを用いて,脊髄の腹側と背側を含むスライス標本(厚さ約150μm)を作成した.この際,脊髄スライス標本は,酸素93%+炭酸ガス7%で通気し,4℃に冷却したクレブス液内で作成した.ついで,この標本を,酸素93%+炭酸ガス7%(われわれのシステムではこの条件下でpH=7.4となる)で通気し,37℃に加温したクレブス液で満たした観察用チャンバーに入れ,約30分間おき,その後,顕微鏡で脊髄内動脈(径5-10μm)を観察した.これらの動脈の画像をCCDカメラで撮影し,メディアコンバータを介してコンピュータに取り込んだ.動脈径の変化は,コンピュータ上で,フィジオテック社製(東京)の血管径測定用のソフトウエアを用いて解析した.ぷ
プロスタグランデインF_<2α>(0.5μM)を観察用チャンバーの潅流液中に入れ,約15分待って標本中の動脈の収縮反応が安定した後に,潅流液を酸素90%+炭素ガス10%の混合ガスで通気した.この変更した混合気で通気した状態で20分間標本を観察した.高炭酸ガスにより,脊髄内動脈は拡張反応を示した.これらの高炭酸ガスによる脊髄血管拡張作用は,少なくとも一部,ATP感受性K^+チャネル拮抗薬であるグリベンクラミドあるいは,一酸化窒素合成酵素阻害薬であるL-NAME処置で抑制された.現在,神経型一酸化窒素合成酵素遺伝子ノックアウトマウスおよび対照マウスの購入手続きを行っている.
なお,画像解析ソフトの精度に,一部問題があり,現在バージョンアップを検討中である.
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