2004 Fiscal Year Annual Research Report

腫瘍抗原の同定と抗原に対する宿主免疫反応動態の解析

Research Project

Project/Area Number	16590315
Research Institution	Okayama University
Principal Investigator	上中明子岡山大学, 大学院・医歯学総合研究科, 助手 (50273967)
Keywords	腫瘍抗原 / 細胞傷害性T細胞(CTL) / エリスポトクローニング / 腎癌 / 肺癌 / Meth A / RL male 1
Research Abstract	1.がん特異的CTL認識抗原の同定 (1)マウスモデル系でのがん抗原の同定マウスモデルにおける免疫反応動態の解析のために、これまでに、マウス線維肉腫Meth Aに対する細胞傷害性T細胞(CTL)認識抗原Rampを同定した。さらに、よりドミナントな抗原検索を目的として、新たにCTLクローンを樹立し、CTLの反応はH-2D^d拘束性であることを明らかにした。抗原の同定のためのエリスポットクローニング用として、2x10^7個の腫瘍細胞からmRNAを採取し、cDNAを得、発現ベクターpcDNA3.1に組み込みライブラリーを作成した。 (2)ヒト自家がん特異的CTL認識抗原の同定腎癌ヒト腎癌CTL認識抗原の検索のためのCTLの樹立を目的とし、患者腹水より得たCD8陽性T細胞を腫瘍細胞で2回刺激培養し、IFNγ産生を指標とした1次スクリーニングの結果、特異反応性CD8T細胞の存在が確認された。肺癌肺癌特異的CTLクローン(OU-LU-26)を用いたCTL認識がん抗原遺伝子のクローニング患者胸水より樹立されたCTLは、HLA抗体を用いた阻止試験、および、他の肺癌細胞との反応性の検討から、HLA-A24拘束性にOU-LU-26を特異的に認識していることが明らかになった。培養肺癌細胞OU-LU-26株2x10^7個の細胞から採取したmRNAからcDNAを得、発現ベクターpcDNA3.1に組み込みライブラリーを作成した。293T細胞にHLA-A24遺伝子およびライブラリー遺伝子をリポフェクション法で導入し、1次、2次とIFNγエリスポットクローニングを進めている。 2.マウス腫瘍モデルでの免疫反応動態の解析マウス白血病RL male 1のCTL認識抗原RL-Akt蛋白を免疫したマウス脾細胞よりRL-Akt特異的CD4T細胞株を樹立した。特異的CD4T細胞株の反応エピトープの同定、および抗腫瘍免疫誘導能について解析を進めている.