コラーゲンビーズカラムによるvWFマルチマースクリーニング法の開発

2004 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 16590450
• Research Institution: University of Yamanashi
• Principal Investigator: 尾崎 由基男 山梨大学, 大学院・医学工学総合研究部, 教授 (30134539)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 浅妻 直樹 山梨大学, 大学院・医学工学総合研究部, 講師 (60293445) ; 佐藤 金夫 山梨大学, 医学部, 教務職員 (20242662)
• Keywords: コラーゲンビーズ / 血小板粘着能 / 血小板活性化 / フォンウィルブランド因子 / マルチマー / リストセチンニファクター

Research Abstract

1.VWF活性のスクリーニングに最適なコラーゲンビーズカラムの作成を試み、種々の条件設定を行った。ビーズの径についての検討では従来の径のビーズ(0.4〜0.6mm)では流速を速めても高ずり応力は生まれず、VWF活性の判定には不適当であった。一方、小径のビーズ(0.125〜0.2mm)を用いる十分な高ずり応力が発生し、VWFと血小板GPIbの反応が評価できる。しかし、この径のビーズではポンプのインジェクション圧が高すぎ、時にカラムよりの血液漏れ、溶血が起きることがあった。今回の研究により0.3mmの径のビーズも用いたが、この径では十分なずり応力を発生させることが出来ないことを確認した。小径のビーズをこれからも使用することとした。
2.VWF活性とコラーゲンビーズカラムによる血小板停滞率の相関
VWF抗原、VWFマルチマーサイズ、リストセチンコファクターはそれぞれVWF活性を評価するファクターであるが、異なった意味合いを持つ。予備実験ではそれぞれが小径コラーゲンビーズカラムによる血小板停滞率と相関することが示されているが、今年度は100例の検体数で評価したところ、健常人ではVWF抗原量とVWFマルチマーサイズはほとんど同様な相関を示した。これは、健常人ではマルチマーサイズが大きく異なる場合がほとんど無く、VWF抗原量が血小板停滞率を規定するためと思われた。次年度はTTP等の疾患の検体で評価をしたい。
3.ADAMTS-13活性の測定
VWF活性とコラーゲンビーズカラム法によりVWFマルチマーが増加していることが示唆される症例については、患者血漿と健常人より採取したVWFをインキュベートした後に電気泳動、ウェスタンブロットを行い、マルチマーサイズの変化を評価した。患者のADMTS-13活性の測定は十分にこの方法で可能なことが確認された。