2005 Fiscal Year Annual Research Report
加齢に伴うヒトゲノムの変化を利用した分子生物学的年齢推定法の確立
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16590538
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| Research Institution | Nagoya University |
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Principal Investigator |
打樋 利英子 名古屋大学, 大学院・医学系研究科, 助手 (20223571)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
勝又 義直 名古屋大学, 大学院・医学系研究科, 教授 (30109326)
山本 敏充 名古屋大学, 大学院医学系研究科, 助教授 (50260592)
玉木 敬二 京都大学, 大学院医学研究科, 教授 (90217175)
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| Keywords | 加齢 / メチル化 / Pyrosequence法 / 皮膚組織 / エラスチン / セラミド / メラニン |
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| Research Abstract |
今年度は、弾性線維の主成分であるElastin(ELN)、セラミド合成関連のβ-Glucocerebrosidase(GBA)及びSphingomyelinase(SMPD1)、セラミド分解酵素のAcid ceramidase 1(ASAH1)、メラニン合成関連のTyrosinase(TYR),5,6-Dihydroxy-indole-2-carboxylic acid oxidase(TYRP1)及びDopachrome tautomerase(DCT)の7種類の遺伝子を選択し、前年度同様に、各年齢層の男女8例の司法解剖から採取された腹部皮膚組織片から抽出したDNA試料を利用して、これら遺伝子でのメチル化の程度を住商バイオサイエンス社に委託してPyrosequence法により解析した。これらの遺伝子のプロモーター周辺領域及び第1エクソンのエンハンサーと推察される領域において、それぞれ2〜3つのPCR増幅産物を設定し、それぞれのPCR産物についてPyrosequencing用プライマーを設計して、Pyrosequencing反応を行った。その結果、GBAとTYR遺伝子のそれぞれ一つの増幅産物においてメチル化の変化が見られたので、より詳細に検討するために、年齢の異なる試料を男女各7例に増やし、それぞれの試料を真皮・表皮組織と皮下結合組織に分離してDNAを抽出した。これらのDNA試料について、メチル化の変化が見られたGBAとTYR遺伝子の各一領域(GBA-F1及びTYR-F1)を増幅して同様に解析したところ、男性試料の真皮・表皮組織と皮下結合組織共にTYR-F1のS2プライマーを利用した領域の2番目のCpG部位で、年齢とメチル化の強い負の相関が見られた。その他の部位では、メチル化の変化量が各年齢層で小さかったり、年齢とは全く相関の見られない大きな変化であった。
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