CGH、マイクロアレイの臨床応用による薬剤耐性悪性神経膠腫の遺伝子診断の確立

2005 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 16591440
• Research Institution: Kobe University
• Principal Investigator: 河村 淳史 神戸大学, 大学院・医学系研究科, 医学研究員 (00346256)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 甲村 英二 神戸大学, 大学院・医学系研究科, 教授 (30225388) ; 篠山 隆司 神戸大学, 医学部附属病院, 臨床研究員 (10379399)
• Keywords: glioma / etoposide / CGH / マイクロアレイ

Research Abstract

1)グリオーマ細胞でのエトポシド耐性株の樹立
T98G, U251細胞株をエトポシド80μg/mlの濃度の細胞培地にて約1ヶ月培養すると、数個のコロニーを形成した。これらのコロニーの細胞を回収して、その後、エトポシドを含まない培地で培養を継続させ、エトポシド耐性株として作製した。Parent細胞とエトポシド耐性細胞を用いて、再度エトポシド80μg/mlの濃度で細胞を培養すると、parent細胞では殆どの細胞が細胞死を起こしたが、エトポシド耐性細胞では殆ど細胞死を起こさなかった。
2)Parent細胞とエトポシド耐性細胞を用いて、エトポシドに暴露させた時のSmac, IAP, Bcl-2,Bcl-XLなどのアポトーシス関連たんぱく質の発現について、ウエスタンブロットにて解析すると、エトポシド耐性株では抗アポトーシス蛋白、IAP, Bcl-2,Bcl-XLの発現増加を認め、アポトーシス誘導蛋白Smacでは発現の低下を認めた。このことから、実際にエトポシド耐性株ではエトポシドによるアポトーシス誘導が抑制されていることが確認された。