羊膜細胞による神経再生研究-神経幹細胞としての確立と虚血脳への移植

2005 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 16591460
• Research Institution: Juntendo University
• Principal Investigator: 新井 一 順天堂大学, 医学部, 教授 (70167229)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 屋田 修 順天堂大学, 医学部, 客員助教授 (30265996) ; 阿部 祐介 順天堂大学, 医学部, 助手 (60286721)
• Keywords: 羊膜細胞 / 神経幹細胞 / 脳内移植 / 虚血モデル / 脳腫瘍モデル / 神経細胞様形態変化

Research Abstract

これまでに、我々は羊膜細胞が多分化能を有し、神経幹細胞としての機能を有している事を確認した。今回、この羊膜細胞を用いて、ラット脳内への移植を行い、形態学的変化や生存度・正着度について検証を行った。移植に用いるラットは、(1)正常ラット(2)虚血モデルラット(3)脳腫瘍モデルラットとした。
方法:(1)妊娠16日及び17日目Wister Ratより羊膜を採取し、37℃インキュベータ内においてB27/DMEM mediumを用いて3日間培養を行い、培養羊膜細胞を樹立した。(2)モデルラット作成:虚血モデルは右中大脳動脈閉塞モデルを作成。脳腫瘍モデルはC6(Glioma)を左前頭葉皮質下に移植し作成。正常ラットはWister8〜9週齢を使用した。(3)脳内移植:培養羊膜細胞をPKH26にてlabelingを行った後、定位脳手術装置を使用し移植した。移植部位は、正常Wisterラット脳へは右海馬、右中大脳動脈閉塞モデルでは、梗塞周囲(右前頭葉皮質下)、脳腫瘍モデルは腫瘍移植部と対側とした。(4)羊膜細胞移植後2週、4週、8週にて各々のモデル動物を還流固定し、移植部位の脳切片を作成。羊膜細胞の形態変化や正着度を検索した。
結果:正常ラット脳内移植において、羊膜細胞は長期にわたり良好な生存を認めた。又、移植後の経時的観察にて脳内における羊膜細胞の移動・正着も認められた。さらに、移植脳内において羊膜細胞の一部は神経細胞様形態変化・成長を来した。中大脳動脈閉塞モデルでは、梗塞部位への移植羊膜細胞の移動を示唆する所見が得られた。腫瘍モデルラットにおいては、腫瘍内への羊膜細胞の移動・正着は認められなかったが、腫瘍への移動を示唆する若干の移植羊膜細胞の脳梁内移動が認められた。