2004 Fiscal Year Annual Research Report
SIAH1の肝発癌における関与の解明と肝癌遺伝子治療の可能性に関する研究
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16659355
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| Research Institution | Kyoto University |
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Principal Investigator |
長谷川 傑 京都大学, 医学研究科, 助手 (10362500)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
佐藤 誠二 京都大学, 医学研究科, 講師 (00303834)
蔦原 康行 京都大学, 医学研究科, 助教授 (30196498)
猪飼 伊和夫 京都大学, 医学研究科, 講師 (60263084)
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| Keywords | SIAH1 / tumor suppressor gene / LOH / mutation / methylation / haplo-insufficiency |
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| Research Abstract |
SIAH1の肝発癌における関与を解明するため、まず肝癌の臨床検体100例と肝癌のcell linesからDNAとRNAを抽出した。このRNAを用いて定量的RT-PCRにてSIAH1遺伝子の発現が低下している症例を選別した。同時にこれらのDNAを使用してSIAH1遺伝子領域近傍のLOHを検索した。
この結果LOH陽性の頻度はSIAH1発現が低下している症例で有意に高かった。よってSIAH1遺伝子の発現低下にLOHが関与している可能性が考えられた。
次にMutation searchを行った。SIAH1発現低下、LOH陽性の50例を対象にSSCP法にて解析したがmutationは認められなかった。
次にMethylation searchとしてSIAH1発現の低下、SIAH1遺伝子領域近傍にLOHを認める15症例を使用した。まず、SIAH1遺伝子のgenomic structureからGrail、Promoter Scanなどの解析ソフトを使用しSIAH1 Promoter領域を同定し、CpG islandとExon 1の一部を含む領域にprimer setを作成した。メチル化異常の評価は抽出DNAのBisulfite Sequence法により、Bisulfite処理を行ったDNAを鋳型とするPCRの条件設定を確定し、TAcloningを施行後Sequenceにて解析した。現在Promoterにメチル化異常は認めていない。
癌抑制遺伝子の発現低下の機序としてtwo hit theoryがあるが、一方の染色体にLOHを認めるがもう一方の染色体にMutationまたはMethylationを認めないことより、SIAH1遺伝子発現の低下にはHaplo-insufficiencyの可能性が考えられる。
今後in vitroとin vivoでSIAH1遺伝子導入による抗腫瘍効果を検討する予定である。
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